广西三七皂苷类成分含量的分析论文

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1、广西三七皂苷类成分含量的分析论文杨海菊孔德鑫黄万清冯秀芳黄荣韶【摘要】目的研究广西三七不同产地、不同部位的皂苷含量特征。方法利用香草醛-高氯酸比色法测定三七中总皂苷含量，以高效液相色谱（HPLC）法测定三七中人参皂苷Rg1，Rb1，Re和三七皂苷R1含量。结果广西靖西县不同产地三七样品的总皂苷及单体皂苷含量存在差异；不同部位间皂苷含量的差异达到极显著水平，以根茎的最高，主根次之；同一样品中，各单体皂苷含量以人参皂苷Rg1最高，人参皂苷Re最低.freell为提取溶剂，超声时间30min，提取次数2次。合并提取液，70℃水浴浓缩至干，用15ml蒸馏水溶解，以1ml/min速度过预处理

2、的AB-8大孔树脂柱，水洗至Molish反应阴性，用100ml70％乙醇以1.5ml/min速度洗脱，至醋酸酐-浓硫酸反应阴性，收集洗脱液作为待测液。本实验在广西大学农学院植物生理实验室内进行。2.1.2标准曲线的制作参照采用香草醛－高氯酸比色法［9］进行准确称定干燥至恒重的人参皂苷Rg1对照品4.9mg，用甲醇溶解定溶于10ml，精确量取0，40，80，160，200，300，400μl置10ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，各加入新配制的5％的香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml于60℃水浴恒温15min，立即置于冰水中冷却5min，加入冰醋酸5ml摇匀，放置10min，

3、以试剂空白做参比于550nm处测定吸光度，以吸光度(A)为横坐标，以对照品溶液加入的体积数(μg)为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.0049X-0.0084(r=0.9996)，对照品在19.6～196μg范围内线性良好。2.1.3样品总皂苷含量测定按照标准曲线项下方法进行比色，测定吸光度，根据回归方程计算总皂苷含量。2.2三七单体的HPLC定量分析2.2.1色谱条件本文参照《中国药典》2005版Ⅰ部［10］收录的三七有效成分含量测定的色谱条件，根据具体使用的仪器略加修改，最终确定色谱条件为：色谱柱：C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水，以0～8min

4、，体积比为19∶81，8～38min，体积比22∶78；38～70min，体积比为22～36∶78～64；70～80min，体积比36～45∶64～55；流速1ml/min的梯度洗脱。柱温为25℃，紫外吸收波长203nm，Rg1与Re的分离度达到1.2，理论塔板数按三七皂苷R1计算大于3000。分离结果见图1～2。图1混合对照品HPLC图谱（略）图2样品的HPLC图谱（略）2.2.2对照品溶液的制备称取人参皂苷Rg1、Rb1、Re和三七皂苷R1各适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg10.4mg，Rb10.4mg，Re0.2mg和三七皂苷R10.2mg的混合溶液，过0.45μm滤膜待

5、用。2.2.3供试品溶液的制备三七粉末（过60目）0.6g，准确称定，准确加入甲醇50ml，称定重量，摇匀，放置2h，超声波提取30min，放冷，再提取30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm滤膜待用。按照选定的色谱条件进行测定。2.2.4线性关系的考察分别准确吸取对照品溶液5，10，15，20，25μl，注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积。以对照品的量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。2.2.5精密度实验取上述对照品溶液，在实验测定条件下进样，每次进样10μl，连续进样5次，根据峰面积计算，

6、三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别为0.89％，1.12％，1.71％和0.25％，结果表明仪器的精密度理想。2.2.6重复性考察准确称取样品3份，按“2.2.3”方法制备样品，按选定的色谱条件测定，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别0.47％，1.64％，0.57％，0.26％（n=5），结果表明，重复性好。表1各单体皂苷的标准曲线（略）2.2.7稳定性考察准确称取靖西3年生样品0.6g，按上述样品溶液制备方法制备，分别吸取10μl，分别于1，6，12，24h测定，记录峰面积，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人

7、参皂苷Re，人参皂苷Rb1的RSD分别1.11％，0.84％，0.55％和0.34％，样品在日内稳定性较好。2.2.8加样回收率实验准确量取一定量的混合对照品溶液置已知皂苷含量的三七样品液中，重复测定5次，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的回收率分别97.04％，97.08％，95.10％和96.21％。3结果3.1广西靖西县三七总皂苷含量比较从图3可看出，靖西不同产区的三七在总皂苷含量上有一定差异，新甲乡总皂苷含量最高，为8.6630％，各