不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验

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1、不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验（哈尔滨中科生物工程有限公司赵前）免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物，包括免疫抑制剂和免疫增强剂。免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。目前在临床上常用的免疫增强剂有黄芪多糖、卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白细胞介素-2（白介素-2）等。本试验选用黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC作为免疫增强剂，以探明不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫免疫效果的影响。1材

2、料与方法1.1试验动物1日龄健康海兰褐蛋鸡，购于泰安东岳种禽有限公司。1.2试验材料96孔V型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。新城疫血凝抑制试验抗原由中国科学院提供；鸡新城疫灭活疫苗（LaSota株）购于乾元浩生物股份有限公司。黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康养殖工程中心提供。RPMI1640培养液（Gibco公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。小牛血清、Hank′s液、台酚兰、肝素钠。1.3试验动物的处理600只健康海兰褐蛋鸡随机分为A、B、C、D、E5组，每组120只。试验在相同的环境下，

3、采用同种饲料进行饲喂和同一防疫程序进行免疫预防。50日龄防疫新城疫Ⅳ系和新城疫灭活疫苗时，免疫增强剂在防疫前后（48~52日龄）连用5d。A组使用预防量的黄芪多糖粉剂，B组盐酸左旋咪唑10mg/kg拌料，每天早晚各一次，C组VE80mg/kg拌料，D组VC100mg/kg拌料，E组不加免疫增强剂，作为对照组。1.4抗体水平检测分别于免疫前1d和免后第7、14、21、28、35、42天，每组随机抽样15只鸡翅静脉采血，分离血清，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T18936-2003）检测抗体

4、效价，计算每组平均值，结果以log2表示。1.5ConA诱导的鸡血液T淋巴细胞转化试验分别于免疫前1d和免后第7、14、21、28、35、42天，每组随机抽取15只鸡翅静脉采取抗凝血，将1.5mL抗凝血与1.5mL细胞培养液（1640，不含胎牛血清）混匀；在灭菌离心管中加入3mL淋巴细胞分离液，并将3mL混匀血液轻轻的平铺在淋巴细胞分离液表面，1500r/min离心20min；将离心分层的淋巴细胞吸出，转到1.5mL离心管中，加入细胞培养液（1640，不含胎牛血清）重悬，3000r/min洗涤两次；将淋巴细胞悬浮于1640细胞培养液中，用台酚兰染色计

5、数活细胞数（应在95%以上），调整细胞浓度为1×107个/mL。将调整好的细胞悬液加入96孔细胞培养板，每孔加99μL，然后实验组加入1μLConA（终浓度为10μg/mL），对照组加入1μL细胞培养液（1640，含胎牛血清），空白对照加入100μL细胞培养液（1640，含胎牛血清）。每个样品作两个平行。将铺好的96孔细胞培养板放入5%CO2，37℃培养箱中培养48h；每孔加入终浓度10μLCCK-8，放入二氧化碳培养箱，孵育1h后用酶标仪（OD450）读数，并计算刺激值。2结果2.1不同免疫增强剂对新城疫抗体水平的影响不同日龄雏鸡新城疫（ND）抗体

6、水平结果见图1。图1不同日龄雏鸡新城疫抗体水平结果（log2）由图1可知，试验A、B、C、D组对ND体液免疫水平的提高均有一定的效果。从70日龄前抗体提升的速度及达到的峰值水平上来看，A组、B组、D组更具有优势，且A组整体抗体水平消减曲线走势较好。由于各试验组ND基础抗体水平不同，所以对免疫后抗体滴度增加值进行了比较。由图2可以清楚看出，各组免疫增强剂对ND体液免疫都有一定的作用，免疫后1周内效果比较明显，A、B、D组与E组差异显著（P<0.05），免后14dD组与E组差异显著（P<0.05），免后21、28、35d各组差异不显著（P>0.05）。图

7、2免疫后不同日龄抗体水平与免疫前抗体水平的差值比较2.2不同免疫增强剂对新城疫疫苗T淋巴细胞转化率的影响不同免疫增强剂对新城疫疫苗T淋巴细胞转化率的影响见图3，由图3可以看出试验A、B、C、D、E组与对照组相比，均具有提高T淋巴细胞转化能力和提高细胞免疫的作用，从免后21日龄前，A、B、D组效果更明显，B组ND细胞免疫水平最好。图3不同免疫增强剂对鸡T淋巴细胞转化率的影响3讨论体液免疫是机体抵抗传染病的主要因素之一，抗体是介导体液免疫的重要分子，抗体效价的高低直接反映机体的体液免疫状态。免疫增强剂能够促进抗体的产生，延缓抗体的下降或消失。由试验可知，

8、黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC均能有效促进鸡新城疫抗体的产生，提高机体免疫水平。其中，黄芪多糖粉剂、