细胞生物学实验考试范围

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1、细胞因子及抗体检测技术1.细胞因子的检测方法：1)生物学方法①依赖性细胞株：生物分析法②功能检测：生物分析法2)分子生物学方法①分子杂交技术：mRNA表达水平的测定②多聚酶链反应技术（PCR）：mRNA的测定3）免疫学方法①免疫测定：免疫酶技术②功能测定与抗体抑制2.抗体检测技术免疫酶技术免疫荧光技术间接血凝试验放射免疫测定蛋白印迹免疫共沉淀亲和力测定3.ELISA实验原理：ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的高度敏感性检测抗原或抗体①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性②使抗

2、原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性③按一定步骤进行抗原抗体反应④加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析4.包被(coating)：将抗原或抗体固定在固相载体的过程。5.封闭(blocking)：是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。6.⑴.ELISA出现“一片黄”的原因：①酶结合物浓度过高②底物不新鲜③洗涤不干净⑵ELISA出现“一片白”的原因

3、：①载体吸附性能差②底物错③稀释液作包被液④加错试剂⑤包被时间过短⑥酶活力低或下降⑦样品含有NaN3单克隆抗体的制备1.抗体的定义–免疫球蛋白：（结构概念）具有抗体活性并具有化学结构的球蛋白。–抗体：（功能概念）与相应抗原特异结合具有免疫功能的球蛋白2.抗原：能与抗体结合的物质（能与T细胞的TCR或B细胞的BCR结合，促使其增殖、分化、产生抗体或致敏淋巴细胞，并与之结合，进而发挥免疫效应的物质。）–免疫原：可刺激产生抗体–半抗原只能结合，不能诱发与载体结合抗原决定簇：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团

4、，又称抗原表位。3.单克隆抗体定义：由一个B淋巴细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”。针对一个抗原决定簇，由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、性质均一、易于大量生产4.抗体生产技术的三个时代–多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体基因工程抗体人源化全人源小型化噬菌体抗体库随着分子生物学发展，单抗技术有了新的突破–嵌合抗体改型抗体人源化抗体转人基因小鼠5.亲本细胞的选择骨髓瘤细胞：①本身不分泌抗体②次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT-）或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）的

5、骨髓瘤细胞B淋巴细胞：①经特定抗原免疫能产生目的抗体②免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致或有相近亲源关系6.有限稀释法(常用)：从阳性分泌孔收集杂交瘤细胞，经逐步稀释，使每孔只有一个细胞。转基因大动物研究简答题:1请简单列举一下转基因技术的方法:•PronuclearInjection显微注射•RetroviralVectorInfectionofEmbryos病毒载体转染胚胎•Sperm-mediatedGeneTransfer精子介导基因转移•EScells胚胎干细胞•SomaticCellNuclea

6、rTransferorCloning体细胞核转移或克隆2简述一下通过病毒载体转染胚胎,从而达到转基因目的的优缺点:Pros:•Infectbothdividingandnon-dividingcells感染分开的和未分开的细胞•HightiterandbroadtargetrangebyusingVSVGenvelopprotein具有较高的效价和宽广的靶位区间•Infectbothembryosandembryonicstemcells感染胎盘和胎盘干细胞•Successfulintransferrin

7、ggenestoearlyembryosofmouse,rat,pig,cattleandmonkey.在小鼠，大鼠，猪，牛和猴子胎盘早期成功实施转移基因Cons:•Activationofproto-oncogenes(1/100,000chance)原癌基因激活•Silenceofthetransgene基因沉默•Sizelimit(upto8.5kb)大小限制名词解释:1同源重组:同源重组（HomologusRecombination)是指发生在姐妹染色单体（sisterchromatin)之间或同

8、一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。2核移植(NuclearTransfer):核移植是将供体细胞核移入去核的卵母细胞中，使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育，让核供体的基因得到完全复制。蛋白质纯化1蛋白质分离方法：1硫酸铵沉淀法：2有机溶剂沉淀法3凝胶过滤法凝胶过滤层析(gelfiltrationchromatography)法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋