分离技术影响因素

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1、影响因素l影响盐析的因素：（1）盐离子浓度：不同的溶质分子，“盐溶”与“盐析”的分界值不同。（2）溶质分子种类：不同溶质分子产生盐析现象所需中性盐的浓度（离子强度）亦不同。（3）溶质分子浓度：一般对于蛋白质溶液，其浓度为2%-3%比较合适，相当于25mg/mL-30mg/mL。（4）pH值：在盐析时，如果要沉析某一成分，应将溶液的pH值调整到该成分的等电点；如果希望某一成分保留在溶液中不析出，则应使溶液的pH值偏离该成分的等电点。（5）温度：多数物质的溶解度会受温度变化的影响。l影响有机溶剂沉析的因素：（1）温度：一般在

2、0℃以下，操作时要在冰盐浴中进行；（2）生物样品的浓度：蛋白质溶液起始浓度0.5%-2%（5-20mg/mL），粘多糖起始浓度1%-2%为宜；（3）pH值：通常选在等电点附近；（4）离子强度：盐浓度一般在0.01-0.05mol/L；（5）金属离子：某些金属离子具有助沉作用l影响PEG沉淀效果的因素：PEG的浓度和相对分子质量，离子强度、溶液pH和温度。l影响溶剂萃取的因素：（一）有机溶剂的选择：（1）根据相似相溶的原理，选择与目标产物极性相近的有机溶剂为萃取剂，可以得到较大的分配系数（根据介电常数判断极性）；（2）有机

3、溶剂与水不互溶，与水有较大的密度差，粘度小，表面张力适中，相分散和相分离容易；（3）应当价廉易得，容易回收，毒性低，腐蚀性小，不与目标产物反应。常用于生化萃取的有机溶剂有丁醇、丁酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯等（二）水相的影响因素：（1）pH的影响：影响表观分配系数（pH~K）；pH低有利于酸性物质分配在有机相，碱性物质分配在水相。对弱酸随pH↓K↑,当pH<>pKb时，K→K0（2）温度T的影响：T↑分子扩散速度↑，萃取速度↑；T影响分配系数；T影响两溶剂的互溶度影响

4、；一般生化物质的萃取在室温或较低温度下进行；一般生化物质的萃取在室温或较低温度下进行。（3）盐析的影响：无机盐(氯化钠、硫酸铵)的作用：生物物质在水中溶解度↓；两相比重差↑，两相互溶度↓（4）乳化现象：蛋白质等生物物质含有亲水基和亲油基两性基团，因此具有表面活性，可以降低溶剂和水的表面张力。乳化带来的问题：有机相和水相分相困难，出现夹带，收率低纯度低现夹带，收率低，纯度低。乳浊液的破坏措施：物理法：离心、加热，吸附，稀释；化学法：加电解质、其他表面活性剂（十二烷基硫酸钠、溴代十五烷基吡啶）（5）带溶剂：对于水溶性强的溶质

5、，可利用脂溶性萃取剂与溶质间的化学反应生成脂溶性复合分子，使溶质向有机相转移。抗生素萃取剂：月桂酸、脂肪碱或胺类等。氨基酸萃取剂：氯化三辛基甲铵。溶质与带溶剂之间的作用：离子对萃取、离子交换萃取、反应萃取。l影响双水相萃取的因素：高聚物相对分子质量和化学性质、被萃取溶质粒子的大小和表面化学性质对双水相萃取都有直接影响。（1）成相聚合物的浓度和分子量：成相系统的总浓度：增大时，系统远离临界点，系线长度增加，两相性质的差别增大，溶质的分配系数大于1或小于1，溶质越容易分配于其中的某一相。存在问题：当系线长度增加时，系统的表面

6、张力增大，可能导致溶质在界面上的吸附。分子量M:当成相高聚物的浓度、盐浓度、温度等条件不变时，被分配的溶质易为相系统中低相对分子质量的高聚物所吸引，而为高相对分子质量的高聚物所排斥。这一规律只表明了分配系数的变化方向，但是分配系数变化的大小主要由被分配物质在（待萃取物）的相对分子质量决定的。通常氨基酸、小分子蛋白的分配系数受高聚物相对分子质量的影响没有大分子蛋白那么显著。利用这一原理分离不同相对分子质量的蛋白质可以获得较好的分离效果。（2）盐的影响各种离子在上下两相的分配存在微小差异，因而产生了相间电位△Ф（道南电位）。

7、通过调节双水相系统盐的浓度,可以有效地萃取分离不同的生物大分子。（3）pH值pH的影响主要表现为：影响相间电位，同时还会影响到弱酸盐的解离，如PEG/Kpi系统，pH的微小变化可能使m变化2-3个数量级。(4)疏水作用和生物亲和分配如果改变成相聚合物的疏水性(引入疏水基团),会使疏水的溶质分子的分配系数发生改变；如果在成相高聚物分子上引入生物亲和配基，也会直接影响生物大分子的分配系数。（5）温度大规模操作一般在室温下进行1)常温下蛋白质不会发生变性;2)常温下溶液粘度较低,容易相分离;3)常温操作节省冷却费用.l反胶束萃

8、取的影响因素（1）pH：当pHpI时，蛋白质分子和表面活性剂内表面都荷负电，相互排斥，蛋白质难溶于胶团中。pH过低时，蛋白质会变