实验肿瘤学基本概念

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1、实验肿瘤学基本概念肿瘤发生发展的一般过程正常细胞癌细胞原位癌浸润癌转移癌休眠预防诊断治疗肿瘤细胞的生物学特点自我满足的生长信号对生长抑制信号不敏感逃避凋亡无限增殖的潜能血管生成浸润和转移实验肿瘤模型的要求忠实地重现人类肿瘤的生物学特性实验肿瘤学的研究方法直接研究建立细胞系建立动物模型细胞系的基本概念组织培养和细胞培养：模拟体内环境在体外培养机体组织和细胞，使之生存和生长。原代培养（primaryculture）:从体内取出组织和细胞的第一次培养。传代（passage）：细胞长满培养瓶后，细胞分成2-3瓶继续培养。细胞系（cellline）:原代培养细胞首次传代成功后的

2、细胞，称细胞系。Finitecellline,continuouscellline,establishedcellline细胞株(cellstrain):通过选择或克隆，从亲代细胞系选出的带有特定标志的细胞群。瘤株：在动物体内可传代的肿瘤细胞系。ATCCAmericanTypeCultureCollection美国模式培养物收集中心,美国菌种保存中心培养细胞的生长方式贴附生长型细胞：细胞附着于支持物表面生长。上皮细胞型：来源于外胚层和内胚层的细胞，细胞为扁平多角形，细胞之间紧密相靠成片。成纤维细胞型：来源于中胚层的细胞，细胞呈梭形，排列成漩状、放射状、栅栏状。悬浮生长

3、型：造血系统的细胞培养细胞的生长特点贴附生长：支持物可为玻璃、塑料、胶原、其他细胞等。停泊或贴壁依赖性细胞（anchorage-dependentcell)接触抑制(contactinhibition)：正常细胞相互接触后，细胞将向另一个方向移动，从而使细胞不会重叠生长。密度抑制(densityinhibition)：正常细胞汇合成片后细胞分裂停止，在静止状态下细胞存活一段时间汇合confluent培养条件基本营养成分RPMI1640DMEM(DulbeccosmodifiedEaglemedium)谷氨酰胺生长因子小牛血清胎牛血清灭活补体56℃30min环境37℃p

4、H7.2-7.4渗透压无污染无毒细菌、支原体体外培养的优点优点：1.活细胞，2.对象均匀，易控制实验条件，易于观察和纪录实验结果3.易研究单个细胞的结构和功能，易于进行分子生物学水平研究，4.实验周期短，成本低，细胞系可长期保存。体外培养的缺点1.在体外细胞生物学行为与在体内不完全一样，G1G0终末分化肿瘤细胞MS介质细胞G22.转化（transformation）:在体外培养过程中细胞的遗传性状发生变化。分为一般转化和恶性转化。一般转化：指细胞获得不死性。恶性转化：指出现在软琼脂培养基中浸润生长；在动物体内成瘤；血清依赖性降低；生长密度依赖性降低。3.体外实验结果不

5、能外推到体内实验细胞培养的应用研究细胞与环境的相互作用细胞间的相互作用细胞内胞质活动细胞质与细胞核之间的流动建立细胞系的基本要求细胞在体外培养半年以上，生长稳定，保持细胞特征并能传代。建系方法1.原代培养：无菌操作，取肿瘤组织，切成小片，小于0.5毫米，进行培养，或用胰酶、胶原酶消化成单细胞悬液，血清灭活酶，培养2.传代：待细胞长满培养瓶，胰酶消化，按1：2-3传代3.去除杂细胞4.冻存细胞10%DMFO+90%胎牛血清，4℃30min,→-20℃2hrs,→-70℃过夜,→液氮，长期保存。登记，定期复苏细胞。复苏：37℃水浴，加培养基洗一次，培养5.鉴定鉴定细胞形态

6、观察癌细胞多角型，重叠生长，核浆比例失调，多核巨细胞染色体分析数量和核型、核带，标记染色体细胞生长曲线和细胞周期集落形成率动物接种成瘤，组织形态学与原发肿瘤相似污染无病毒、支原体污染、细胞间交叉污染Helacell:1951年HenriettaLack宫颈癌实验动物基础知识法规1988年中华人民共和国实验动物管理条例1989年医学实验动物管理实施细则1994年关于在全国医疗卫生系统实行实验动物合格证制度得通知（医学实验动物合格证书，医学实验动物环境设施合格证书，医学实验动物全价营养饲料合格证书，医学实验动物饲料生产条件合格证书）1988年广东省实验动物管理办法基本概念

7、实验动物（laboratoryanimal）:指人工培育的、对其携带微生物实行控制、来源清楚、遗传背景清晰、可用于科学实验的动物。实验用动物（animalforresearch）:能用于科学实验的动物，包括实验动物、野生动物、经济动物和观赏动物。标准化实验动物：有明确的遗传背景、繁殖方法、饲养环境、饲料成分均达到标准的实验动物。在科学研究中必须使用标准化实验动物。实验动物的分类(遗传背景)近交系（纯系）：连续20代以上兄妹交配或亲子交配而获得的遗传上达到一致的动物群。如BLAB/c小鼠。杂交群:两个近交系动物间有计划进行交配获得的第一代动物。封闭群：