033111113036 双向凝胶电泳技术原理与应用

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1、双向凝胶电泳技术原理与应用Principleandapplicationoftwo-dimensionalgelelectrophoresis姓名：XX班级：检验本科1113班学号：XXX【摘要】人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于2001年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。包括蛋白质组、蛋白质组学、功能蛋白质组学和结构基因组学等新的概念的提出，蛋白质组学已成为当今生物

2、领域中极其活跃的学科。其中双向电泳（two-dimensionalelectrophoresis，2.DE）是蛋白质组研究的三大关键核心技术之一【abstract】HumangenegroupplansandUnitedStatessailailageneticinformationcompanyYu2001inUnitedStatesScienceundermagazineandUnitedKingdomnaturalundermagazinejointannounced,theydrawsouthasaccurate,andclear,andcompleteofhumangeneGrou

3、pmap,atthispoint,humangenegroupplanshasbasiccompleted,asHougenegrouperaofcomes,proteingrouplearngethasunprecedentedofdevelopment,proteingroupresearchaimedatrevealsgeneexpressofrealimplementationlifeactivitiesofallproteinofexpresslawandbiologicalfunction.Includesproteome,proteomics,structuralproteom

4、icsandfunctionalgenomicsofnewconcepts,suchasproposed,proteomicshasbecomeextremelyactiveinthefieldofbiologicalsciences.Two-dimensionalgelelectrophoresis(two-dimensionalelectrophoresis,2.DE)isoneofthethreekeycoretechnologiesofproteomeresearch【关键词】双向电泳；蛋白质组学；后基因组时代【keywords】two-dimensionalelectrophore

5、sis，2.DEproteomicsPost-genomicsera【前言】由于蛋白质的等电点和分子量是两个彼此不相关的重要性质，而2.DE同时利用了蛋白质间的这两个性质上的差异分离蛋白质，因此2.DE的分离能力非常强大，它甚至能将细胞中的5000种蛋白分离开，2.DE在分离蛋白混合样品、比较差异方面有不可替代的作用，结合质谱鉴定技术可查明大型蛋白复合物各组组分，与其他生物技术如分子生物学、分子遗传工程、免疫学、微量蛋白质的自动氨基酸序列分析相结合，可以快速准确地发现和鉴定新的蛋白质。【荧光定量PCR的基本原理】【1-3】双向电泳由于具有高分辨率和高灵敏度已成为分析复杂蛋白混合物的基本工具［

6、1］。自1975年O'Farrel等［2］建立这种技术后，已有许多改进，使得这一技术日趋完善。2-DE是利用蛋白质的带点性和分子量大小的差异，通过两次凝胶电泳达到分离蛋白质的技术。第一向电泳是依据蛋白质的等电点不同，通过等电聚焦电泳（isoelec-tricfocusing，IEF）将不同净电荷的蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成分离的蛋白质区带。然后将凝胶包埋在SDS-PAGE凝胶板上端，根据蛋白质分子量的不同，在垂直或水平方向进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），即第二向电泳;在IEF中，蛋白质因等电点不同而被分离;在SDS.PAGE中，不同分子量的蛋白质相互间

7、被分离开，再用考马斯亮兰或银染进行检测［3］，经Pdquest等软件对结果进行比对、解析。【双向电泳技术应用过程中的关键步骤】1、样品制备（蛋白提取）　（1）细胞培养、处理和收集;（2）将细胞在IEF裂解缓冲液中溶解;蛋白质的溶解常采用含有8mol/L尿素、4%[3-(3-胆胺丙基)–丙磺酸]（SHAPS）、50~100mmol/LDTT和40mmol/LTris的样品缓冲液。样品溶解得不好会减少分离到的蛋白