db33 t 6253-2007 无公害豆芽 第3部分 6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定

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1、DB33/T××××.3—2006浙江省质量技术监督局发布2007-03-05实施2007-02-05发布无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定DB33/T625.3—2007DB33浙江省地方标准ICS67.050C53备案号：1DB33/T625.3—2007前言DB33/625－2007《无公害豆芽》分为三个部分：——第1部分：生产技术规程；——第2部分：质量安全要求；——第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定。本部分为DB33/625－2007《无公害豆芽》第3部

2、分。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分起草单位：浙江省疾病预防控制中心、宁波市疾病预防控制中心、杭州市质量技术监督检测院、浙江省农业厅农作物管理局、宁波市卫生监督所、宁波市五龙潭蔬菜食品有限公司、宁波市质量技术监督局。本部分主要起草人：李小平、韩见龙、蔡增轩、金米聪、赵建阳、芮昶、蒋经伟、陶礼明、戴建刚。IDB33/T625.3—2007无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定第一法豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的测定——LC-MS/MS法1　范围本方法规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法。

3、本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定。本方法检出限为1×10-6mg/kg。2　原理豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取，反相柱分离，电喷雾离子化（ESI）和多离子反应监测（MRM）方式进行定量测定。以试样峰的保留时间、母离子（m/z:226.20[M+H]+）与子离子(226.20>91.0,226.20>147.90)定性，以子离子(226.20>91.0)峰面积外标法定量。3　试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水。3.1　乙酸。3.2　乙腈（HPLC）。3.3　甲醇（HPLC）。3.4　50%的甲

4、醇水溶液。3.5　酸化甲醇：每100mL甲醇中加入乙酸50μL，混匀。3.6　标准溶液的配置：3.6.1　标准储备溶液精密称取6-苄基腺嘌呤（含量＞98.0％）0.1000g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。此标准储备溶液每毫升相当于1.0mg6-苄基腺嘌呤。标准使用液用甲醇稀释至每毫升含1μg的6-苄基腺嘌呤。在4℃冰箱中储存，有效期1个月。3.6.2　标准工作溶液3.6.2.1　空白豆芽萃取液制备选择在生产过程中未添加6-苄基腺嘌呤的豆芽菜。按5.1试样处理方法提取，经0.22μm有机滤膜过

5、滤。必要时使用LC-MS/MS分析，以确定在6-苄基腺嘌呤出峰处不存在干扰。3.6.2.2　标准工作溶液系列配制准确吸取标注使用液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL于进样瓶中，加空白豆芽萃取液（3.6.2.1）至1mL。配制成浓度依次为1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、6ng/mL、8ng/mL、10ng/mL的标准溶液系列，供LC-MS/MS分析。4　仪器4.1　组织捣碎机。7DB33/T625.3—20071.1　天平（精度0.01和0.0001g）。1.2　高效液相色谱-电喷雾-串联四极杆质谱（L

6、C-ESI-MS/MS）。1.3　均质机（速度范围：6,000－24,000rpm）。1.4　离心机(最高转速:15,000RPM)。2　分析步骤2.1　试样处理称取豆芽样品500g用食物粉碎机粉碎后，取5g样品（精确至0.01g）于50mL聚丙烯离心管中，加入10mL酸化甲醇，用均质机匀质3min,10000rpm离心10min，上清液转入50mL容量瓶中，样品再用10mL酸化甲醇重复提取一次。合并上清液，用水定容至刻度，摇匀，吸取2mL于10容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀，经0.2μm滤膜过滤，供LC-MS

7、/MS分析。2.2　色谱参考条件色谱柱：WatersSunFireC18柱（2.1mm×150mm，5μm颗径）。流动相A：水（0.1%甲酸）。流动相B：甲醇（0.1%甲酸）。流速：0.30mL/min。进样量：10uL。柱温：35℃。表1梯度洗脱条件时间（min）流动相A流动相B变化曲线0.0050%50%3.0044%56%63.250%0%64.250%0%14.5050%50%68.0050%50%1注：变化曲线：1为立即变化，6为线性变化2.3　质谱参考条件离子化方式ESI+。毛细管电压(kV)3.00。锥孔电压(

8、V)57。RFLens135.0。Aperture(V)0.0。RFLens20.3。源温度(℃)120。脱溶剂温度(℃)350。锥孔反吹气流(L/Hr)50。脱溶剂气流(L/Hr)454。LM1Resolution12.0。HM1Resolution12.0。离子能量10.5。LM2Re