hiv快速检测方法及应用

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1、HIV快速检测方法及应用甘肃省疾病预防控制中心二○一一年四月白莉HIV抗体检测的主要技术依据《全国艾滋病检测技术规范》（2009年修订版）09.9《病原微生物实验室生物安全管理条例》04.11《实验室生物安全通用要求》（GB-19489-2004）04.10《全国艾滋病检测工作管理办法》06.6HIV抗体检测HIV抗体检测试验分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验。检测抗-HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指标，也是控制HIV传播和AIDS流行的重要手段。抗-HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠，故必须经筛查、复检试验和确认实验三个步骤。初筛实验方法主要有：

2、酶联免疫试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、免疫层析试验等。确认试验主要用免疫印迹试验（Westernblot,WB）、免疫荧光试验（IFA）。快速检测试验（RT）明胶颗粒凝集（ParticleAgglutination,PA)免疫渗漏（Immunoconcentration,Flowthrough,FT)免疫层析（Immunochromatograpy,lateralflow,IF)*用最新快速HIV试剂检测HIV抗体比第三代EIA晚2－8天目前在国内批准注册的国外进口试剂有：DetermineHIV1/2（ABBOTT，雅培）、韩国SD、麦美华、中新科炬等一般

3、10-30min内出结果，超过60min判断结果无效。2003年国内已有产品被批准，万泰、科华、艾康等快速检测试验（RT）明胶颗粒凝集试验（PA）PA是一种简便的HIV血清抗体检测方法。先将样品稀释，然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒，混匀后保温（一般为室温）2H，观察结果。操作简便，无需特殊仪器设备，适合对少量标本的检测。血清中有HIV抗体存在时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。明胶颗粒凝集试验（PA）HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂（AFDHIV1/2PA）,可用于HIV1/2的筛查.HIV-1、H

4、IV-2抗原分别致敏的PA试剂（AERODIA-HIV-1/2）可用于区分HIV-1型和HIV-2型。缺点:判定结果用肉眼观察，结果无法保存。目前为了保存试验结果，有条件的实验室可配备数码相机，记录每次试验结果。PA定性试验C对照颗粒S致敏颗粒M阴性颗粒胶体硒法(免疫层析法)在使用试剂前必须仔细阅读说明书,需严格按照说明书执行,否则无法保证可靠的结果原理:以硝酸纤维膜(玻璃纤维膜)为载体。是一种用免疫层析法定性测定血样中HIV1/2抗体,加样本入反应条,当样品迁移通过结合物包被处,与硒胶体-抗原结合物重组结合,此混合物继续迁移通过固相包被的合成肽和重组抗原的病人结果窗口如果

5、样品中含有HIV1/2抗体,抗体将会与硒胶体-抗原结合,并在病人窗口处被固相包被的合成肽和重组抗原所捕捉固定,形成一条红线;如果样品中不含有HIV1/2抗体,硒胶体-抗原结合物将会通过病人窗口而不与固相包被的合成肽和重组抗原结合,则没有一条红线形成;为了确保结果有效,在反应条中含有质控条带。胶体硒法(免疫层析法)样品垫:加入血浆,血清或全血样品.红细胞在此迁移过程中被去除连接物垫:含分析特异性试剂结合的硒标,为一种肉眼可见的红色信号,被分析物和硒标特异性试剂在此反应结合病人条:固定的含特异性分析试剂,任何与硒标特异性试剂结合的分析复合物在此被结合固定,形成三文治结合物,肉眼

6、可见的红色线条说明有阳性反应质控条:固定的含捕捉硒标物的特异性试剂,不管样品中有无被检测物都应出现红色线条.控制测试结果的有效性胶体硒法(免疫层析法)撕下所需的测试纸条数,撕下表面保护膜胶体硒法(免疫层析法)血清/血浆样品加50ul样品于样品垫中15分钟内读取结果胶体硒法(免疫层析法)全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法静脉血方法加一滴缓冲液15分钟内读取结果胶体硒法(免疫层析法)病人条质控条胶体硒法(免疫层析法)对筛查试验结果的解释筛查实验的目的是检出所有的阳性者，在得到一个筛查试验阳性结果时，要想到它极有可能是真正的阳性，但也有假阳性的可能出现假阳性的原因很多，如

7、风湿病、病毒性肝炎、大量溶血的样品、不用EDTA抗凝的全血血浆样品等筛查试验结果的报告呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告所有筛查试验阳性的标都应进行复检筛查试验阳性的样品，需填写“HIV抗体复检检测单”，必须有检测人，一名具有中级以上技术职称的复核人审核签字，送当地艾滋病筛查中心实验室复检，再转送艾滋病确证实验室稳定，可室温长期保存。试验不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。已有被SFDA批准注册的进口试剂和国内产品。一般可在1030mi