前列腺素e1脂微球制剂对大鼠急性肺损伤的影响

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1、前列腺素E1脂微球制剂对大鼠急性肺损伤的影响【摘要】目的:采用大鼠腹腔注射脂多糖（LPS）复制大鼠急性肺损伤（ALI）模型，评价前列腺素E1脂微球制剂（凯时）对急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:雄性健康SpragueDae,ARDS）是ICU常见呼吸衰竭之一［1］。ALI和ARDS具有相同性质的病理生理学改变，所有的ARDS患者都是ALI，但并非所有的ALI患者都是ARDS，ALI是ARDS的早期阶段［2］。有多种致病因素引起ALI/ARDS，其中感染（尤其是革兰阴性菌感染）为首位。LPS是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，它诱导的ALI/ARDS的主要病

2、理生理学改变是肺组织中大量中性粒细胞浸润和肺血管损伤所致的肺水肿［3］。临床上以急性进行性呼吸困难、严重低氧血症，弥漫性肺浸润，肺顺应性降低为主要特征［3，4］。文献中最早出现ALI/ARDS是在1967年，Ashbaugh等报道了由12例患者组成的资料［5］。自那以来，ALI/ARDS的治疗主要以呼吸机治疗为主，尚无满意的药物治疗。为探讨新的冶疗药物，本研究采用前列腺素E1脂微球制剂（Lipo-PGE1,凯时）治疗由LPS诱导的大鼠急性肺损伤，以评价其治疗效果，为临床治疗ALI/ARDS提供理论依据。1材料和方法1.1主要试剂髓过氧化物酶（MPO

3、）试剂盒、白蛋白试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒和丙二荃（MDA）检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，TNF-a、IL-10、IL-12ELISA试剂盒由意大利米兰的Calbiochem-Novabiochem公司提供，脂多糖（LPS）购置美国Sigama公司，凯时为北京泰德有限公司生产。1.2动物健康成年雄性SpragueDag/kg腹腔注射麻醉后，A，B组大鼠尾静脉注射生量盐水0.5ml，C组将lipo-PGE1按10ug/kg溶于0.5ml生理盐水尾静脉注射。1h后A组腹腔注射生理盐水1ml，B，C组将LPS按6mg/kg溶于1m

4、l生理盐腹腔注射。于3h后实验结束。1.4测定肺泡灌洗液中白蛋白浓度实验结束后行经部切开气管置管，通过气管导管注射预冷生理盐水2ml，用注射器轻柔抽提后抽出灌洗液，用溴甲酚氯法测定白蛋白浓度并计算肺通透指数（PPI）：PPI=BALF蛋白含量/血浆蛋白含量。1.5肺组织湿干重比实验结束后，经胸骨正中行剖胸术，心脏穿刺抽血2~3ml，留血清于-80℃保存备用。同时迅速摘取肺脏，吸干表面血污后观察大体改变，称肺计算肺系数（肺系数=肺重量/体重×100%）。取右肺中叶，滤纸吸干表面水分，称湿重（DA和MPO含量测定将肺组织剪碎匀浆，分别取0.1ml肺组织

5、匀浆液，TBA荧光测定法测量MDA含量，分光光度法测定SOD含量，根据文献报道［6，7］的方法测定肺组织中髓过氧化物酶（MPO）的活性。上述操作均按照试剂说明盒进行。1.8肺组织中NF-kBp65的表达取匀浆肺组织20mg，按文献进行Westernblot实验测定NF-kB蛋白的表达［8］。1.9统计学处理统计学处理采用SPAA10.0统计软件。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有显著性。2.2肺组织中SOD，MPO，MDA含量表2示B、C组肺组织中MPO，MDA含量明显高于A组（P＜0.05）。C

6、组肺组织中MPO，MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。表2示B、C组肺组织中SOD活性明显低于A组（P＜0.05）。C组肺组织中SOD含量明显高于B组（P＜0.05）。2.3炎症因子与抗炎症因子浓度表3示B、C组血清中TNF-a，IL-12的浓度明显高于A组，IL-10浓度明显低于A组（P＜0.05）。C组血清中TNF-a，IL-12的浓度明显低于B组，IL-10浓度明显高于B组（P＜0.05）。2.4肺组织中NF-kBp65的表达图1示B、C组的NF-kBp65表达明显高于A组（P＜0.05），C组NF-kBp65的表达明显低于B组（P＜0.

7、05）。表1各组肺系数，肺通透指数，肺湿重/肺干重比较表2各组组织SOD、MPO、MDA水平的改变注：*与A组比较（P＜0.05）;#与B组比较（P＜0.05）。表3血清中TNF-a、IL-12、IL-10浓度变化注：*与A组比较（P＜0.05）;#与B组比较（P＜0.05）。3讨论ALI/ADRS是由于炎症反应导致肺毛细血管内皮和肺泡上皮损伤、血管通透性增高的监床综合征，其一系列临床、影像学和生理学的异常表现不能用左房压或肺毛细血管压力升高所解释。病理生理改变以肺顺应性降低，肺内分流增加及通气血流比例失衡为主。临床表现为呼吸急促和呼吸窘迫、顽固性

8、低氧血症，胸部X线显示双肺弥漫性浸润影，后期常并发多器官功能衰竭。过去30年中对ALI/ARDS的发病机理进行了深入研究，