卵巢癌组织klk11基因的表达意义

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1、卵巢癌组织KLK11基因的表达意义　　【Abstract】AIM:ToexploretheexpressionofKLK11geneanditsclinicalsignificanceinhumanovariancancer.METHODS:RTPCRandimmunohistochemistryRNAandproteinin48patients.ExpressionofKLK11atmRNAandproteinlevelsshooderatecancerdifferentiationthantheonesa.CONCLUSION:KLK11expressionmightberel

2、atedtothemalignancyofovariancarcinoma.　　【Keyerasechainreaction;immunohistochemistry　　【摘要】目的：探讨卵巢癌KLK11基因中的表达及临床意义.方法：采用RTPCR和免疫组化技术检测48例卵巢癌组织中KLK11mRNA及其蛋白的表达，并分析其与临床病理资料的关系.结果：KLK11蛋白表达位于细胞质.KLK11mRNA及蛋白的表达与临床分期有关，晚期（Ⅲ,Ⅳ期）KLK11mRNA及蛋白的表达水平明显高于早期（Ⅰ,Ⅱ期，P<0.05），中低分化癌KLK11mRNA及蛋白的表达明显高于高分化癌（P&

3、lt;0.05），但KLK11mRNA及蛋白的表达与组织学类型无关.结论：KLK11基因表达可能与卵巢癌的恶性程度有关.　　【关键词】卵巢癌；KLK11；RTRCR；免疫组织化学　　0引言　　　　卵巢癌死亡率占女性生殖系统恶性肿瘤的首位，至今发病机制尚未阐明，缺乏有效的早期诊断和治疗方法［1］.人激肽释放酶基因家族Kallikrein（KLK）广泛存在于各种组织和体液中，编码相应的激肽释放酶HK,参与多种生理和病理过程.Borqono等［2］发现70%的卵巢癌患者血清中HK11水平升高，提示KLK11在卵巢癌中可能存在异常表达.我们采用逆转录―聚合酶链式反应（RTPCR）和免疫组化

4、技术检测卵巢癌组织KLK11mRNA及蛋白的表达，并结合临床病理特征进行分析,旨在探讨KLK11基因的表达与卵巢癌发病的关系，并初步探讨其发生机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　200411/200608首发卵巢癌手术新鲜标本48例，术前未经放化疗.年龄35－75（平均55）岁.切除卵巢均经患者同意.按FIGO（1986年）修订的原发性卵巢恶性肿瘤的分期标准进行临床分期，Ⅰ期6例，Ⅱ期12例，Ⅲ期20例，Ⅳ期10例.按V逆转录酶将其反转录成cDNA,βactin作为内参照基因.KLK基因和βactin均由上海英骏生化公司合成，KLK11基因引物正链：5′CCGCTACATAGT

5、TCACCTGG3′，反链：5′AGGTGTGAGGCAGGCGTAACT3′，扩增片断为296bp.βactincDNA特异性引物作为对照.PCR反应条件：95℃变性4min,95℃变性30s,56℃退火30s,72℃延伸30s，循环35次，最后72℃延伸5min.PCR反应产物经过15g/L琼脂糖凝胶电泳检测，凝胶成像仪观察拍照，应用DolphinDUL软件分析癌灶及正常卵巢组织中KLK11mRNA/βactionmRNA相对表达比.　　1.2.2免疫组化检测KLK11蛋白表达采用SABC法，SABC试剂盒购自迈新生物公司.石蜡包埋切片，切片厚4μm，脱蜡水化，阻断内源性过氧化

6、物酶，微波修复抗原，羊血清封闭室温孵育，鼠抗人KLK11(mAb,1∶600，购自Abcam公司)，4℃过夜，滴加生物素标记的羊抗鼠IgG，室温下孵育，滴加SABC复合物，DAB/H2O2液显色，中性树胶封片.PBS代替一抗为阴性对照.KLK11阳性染色为棕黄色颗粒，采用德国LeicaRX250型图像分析系统对免疫组化阳性染色进行定量分析，每张切片任选5个视野，测量每张切片阳性染色相对面积（阳性细胞面积/镜下细胞及间质总面积×100%）和阳性染色的灰度值.　　统计学分析：应用SPSS11.0软件对KLK11基因表达情况进行统计学分析，不同临床病理分级及组织学类型间基因表达阳性率的比

7、较用χ2检验进行，切片阳性染色积分灰度值组间比较用方差分析进行.P<0.05为差异有统计学意义.　　M:DL2000marker;N1,N2,N3:正常卵巢;T1:Ⅲ期卵巢癌;T2:Ⅱ期卵巢癌;T3:Ⅰ期卵巢癌.　　图1RTPCR检测KLK11基因mRNA表达（略）　　表1卵巢癌KLK11mRNA表达(略)　　aP<0.05vsⅠⅡ期;bP<0.01vs中低分化.　　2.2KLK11基因蛋白表达免疫组化阳性染色为棕黄色颗粒沉淀，位于癌细胞的细胞质（图