慢性阻塞性肺病中aqp4 mrna的表达变化及与气道炎症的相关研究

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1、慢性阻塞性肺病中AQP4mRNA的表达变化及与气道炎症的相关研究【关键词】慢性阻塞性肺病；水通道；气道炎症　　ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectandsignificanceofAQP4mRNAexpressioninbronchialepitheliumofchronicobstructivepulmonarydisease(COPD)onairmation.MethodsBronchialepitheliumedtobenormalbythepathol

2、ogist.AQP4mRNAethod.Inflammatorycellsinfiltrationonaryfunctiontestedtoobeforebronchoscopy.ResultsparedRNAexpressioninCOPDore,AQP4mRNAexpressionmationofbronchialepithelium(r=-0.493,P<0.01),andcorrelatedpositivelyRNAinbronchialepitheliumofpatientsid

3、ification,aggravatedtheairmation,andcontributedtothedevelopmentofCOPD.　　KEYonarydisease;aquaporin;airmation　　气道水转运特性对于吸入气体的湿化和维持气道表面液层的容积和组成具有重要作用，气道表面液层的容积和组成异常在一些气道疾病如哮喘和支气管炎的发病中起重要作用。本研究检测了水通道4(aquaporin,AQP4)mRNA在慢性阻塞性肺病患者和正常支气管对照者的支气管黏膜中的表达，以探讨A

4、QP4与气道慢性炎症的关系及在COPD发病中的作用。　　1对象与方法　　1.1研究对象　　正常对照组选取因各种原因行支气管镜检查被病理学家证实为正常支气管黏膜者，共30例，年龄25-73岁，平均(53.33±11.51)岁。其中男性18例，女性12例。慢性阻塞性肺疾病组(COPD组)选取符合中华医学会呼吸分会慢性阻塞性肺疾病学组颁布的慢性阻塞性肺疾病的诊治指南标准的COPD患者30例，年龄35-71岁，平均(55.93±12.31)岁。其中男性20例，女性10例。两组资料在年龄及性别上无显著性差

5、异(P>0.05)，具有可比性。以上两组均不包括合并其他严重心肺疾病不能耐受气管镜检查者及合并呼吸衰竭者。　　1.2试剂　　Trizol试剂购于美国sigma公司，RTPCR试剂盒、DEPC购于北京鼎国生物技术有限责任公司，DNAmarker购于北京赛百盛基因技术有限公司，AQP4引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。　　1.3标本收集　　各组在10g/L的卡因表面麻醉及20g/L利多卡因环甲膜穿刺麻醉后行气管镜检，钳取黏膜后一部分放于10%(体积分数)甲醛中固定，一部分放在DEPC水处

6、理过的冻存管中，置入冰壶内运送，1h之内放在液氮中保存。　　1.4方法　　1.4.1肺功能检查　　各组在平静休息5-10min后，使用德国耶格公司JAEGER肺功仪作肺功能检查，主要测量用力呼气肺活量(FVC)、1s用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1/pred%)、1s用力呼气容积占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC)等指标。　　1.4.2形态学观察　　组织块经10%(体积分数)甲醛固定后，酒精梯度脱水，常规石蜡包埋，切片厚度5μm，HE染色，显微镜下观察。　　1.4.3逆转录　　聚合酶

7、链反应(RTPCR)检测AQP4mRNA表达Trizol试剂提取支气管黏膜总RNA。分光光度计测定提取的RNA浓度。取4μg总RNA进行扩增，AQP4上游引物：5′GGAATCCTCTATCTGGTCACA3′50pmol，下游引物：5′TGTTTGCTGGGCAGCTTTGCT3′50pmol，内参βactin上游引物：5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3′，下游5′CTTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3′，PCR反应条件：94℃预变性2min，94

8、℃变性45s，55℃复性45s，72℃延伸45s，扩增30轮，72℃延伸加时5min。将产物在20g/L琼脂糖凝胶中电泳，扩增产物片段分别是AQP4429bp，βactin540bp。用图像分析系统进行定量分析。　　1.5结果判定　　HE染色：炎性细胞散在分布(+)，局灶性分布()，弥漫分布()。PCR产物量的计算：DNA含量＝(待测标本A-背景A)/(阴性对照A-背景A)　　1.6统计学处理　　所有数值资料均以均数士标准差(±s)表示。所有数据均使用SPSS13.0统计软件处理。α＝0.