克拉霉素抑制血管生成及肿瘤转移的实验

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1、克拉霉素抑制血管生成及肿瘤转移的实验摘要:目的研究克拉霉素对血管生成的影响并在此基础上观察其抗肿瘤转移的作用，为其临床应用提供实验依据.方法采用b-FGF诱导小鼠腹壁Matrigel种植体方法进行血管生成实验，比较克拉霉素处理组和对照组Matrigel种植体内血红蛋白含量和微血管面积的差异.采用Leg・kg-1・d-1时，Matrigel种植体中血红蛋白含量和微血管面积开始明显减少，并具有剂量-效应关系.克拉霉素能够明显降低肿瘤组织内的微血管密度［（27±10）vs（14±7），P=0.042］，肺脏转移瘤数量［（10±5）vs（17±9），P=0.039］并明显

2、延长荷瘤小鼠的存活时间［（27±10）dvs（19±8）d，P=0.022］.结论克拉霉素对b-FGF诱导和肿瘤组织内的血管生成均具有明显抑制作用，能够有效减少荷瘤小鼠的肿瘤转移并延长存活时间，在肿瘤的综合治疗中具有一定的应用价值.　　Keyycin;angiogenesis;carcinoma，leycinonangiogenesisandtumormetastasisinmice.METHODSUsingquantitativeanalysistoparehemoglobinandmicrovascularareasinMatrigelimplantbe-ticrovesseldensi

3、tyintumor，occurrenceoflungmetastasis，tumorvolumeandmeansurvivaltimeor-bearingC57BL/6mice.RESULTSQuantitativeanalysisofhemoglobinandmicrovascularareasinMatrigelimplantindicatedthatclarithromycincaninhibitangiogenesisathighconcentration.Clarithromycineffectivelyreducedthequantitationofmicrovesseldens

4、ityintumor，thenumberoftumornoduleinthelungandincreasedthemeansurvivaltimeoftumor-bearingmice.CONCLUSIONClar-ithromycinhasinhibitoryeffectonangiogenesisandtumormetastasisandmighthavetherapeuticvalueintumortreat-ment.　　0引言　　血管生成（angiogenesis）在肿瘤的生长和转移中发挥着重要的作用，抗血管生成是目前肿瘤治疗的热点课题［1，2］.克拉霉素（clarithromyc

5、in，CAM）是临床上常用的新型14环大环内酯类抗生素，近年来有关此类抗生素具有生物反应调节作用的研究引人注目［3-5］，由于CAM参与调控的细胞因子中许多与血管生成密切相关，因此CAM可能具有潜在的抗血管生成作用.鉴于此，我们采用Matrigel种植体的方法，观察CAM对b-FGF诱导小鼠腹壁血管生成的影响，并在此基础上观察其对Lea），血红蛋白测定试剂（Sigma），CD31抗体（SantaCruz），S-P组化试剂盒（北京中山生物公司）.　　1.2方法　　1.2.1Matrigel种植与分组［6］用含牛血清白蛋白的PBS液分别稀释b-FGF、肝素至实验浓度，取b-FGF50μL（100

6、ng）、肝素50μL（50U）与冰浴中的Matrigel500μL混匀，小鼠麻醉后腹部正中区域皮下注射.CAM抑制实验于Matrigel种植前3d开始，按10～70mg・kg-1・d-1的剂量梯度分为7个剂量组，每组5只，经胃管给实验小鼠灌注，1次・d-1，连续8d，对照小鼠以等体积50g・L-1葡萄糖代替CAM，灌注方法和时间同实验组.　　1.2.2血红蛋白含量测定Matrigel种植5d后断颈处死小鼠，手术切开腹部皮肤，取出Matrigel种植体，生理盐水中清洗2～3次.将Matrigel种植体置于干冰上干燥12h称重，悬浮于0.5

7、mL0.01g・L-1Triton-100中1～2h并用吸管吹成悬液，15000g离心15min，用分光光度计测量上清中的血红蛋白A405nm值.　　1.2.3微血管面积的测定Matrigel种植体经常规固定，石蜡包埋，制成5μm切片，常规脱蜡，逐渐水化，先经30mL・L-1H2O2阻断内源性过氧化物酶，0.01mol・L-1枸缘酸缓冲液行抗原修复，再依次加入30mL