苦瓜伤流液喷干粉降血糖作用及急性毒性实验研究

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1、苦瓜伤流液喷干粉降血糖作用及急性毒性实验研究【摘要】目的研究苦瓜伤流液喷干粉的降糖作用及其急性毒性。方法选用链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病小鼠模型，观察苦瓜伤流液喷干粉对糖尿病小鼠空腹血糖值、血脂水平及肝糖原含量的影响，并通过急性毒性试验确定其LD50。结果苦瓜伤流液喷干粉能显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖值及血脂水平，并增加糖尿病小鼠肝糖原含量;急性毒性试验结果表明，苦瓜伤流液喷干粉的经口LD50在11400～12300mg/kg之间，参照我国食品毒理急性毒性分级标准，苦瓜伤流液喷干粉属实际无毒。结论苦瓜伤流液喷干粉可以作为糖尿病患者的辅助降糖食品。【关键词】苦瓜伤流液喷干粉;降血糖

2、;急性毒性实验糖尿病是常见的代谢性疾病，它的发病率呈逐年上升趋势，因此糖尿病的预防和治疗日益受到关注。苦瓜药食兼用，是著名民间中草药，在我国已有五百余年的应用史[1]。《本草纲目》曰：苦瓜“去邪热，解劳乏，清心明目”[2]。近年来，许多药理实验研究表明苦瓜及苦瓜提取物具有降血糖活性[3～5]。植物伤流液是植株茎干切断后木质部液流在根压作用下流出体外的汁液[6]。现代研究表明植物伤流液中含有大量矿质元素、植物激素、糖类、蛋白质、酚类等活性物质[7]。苦瓜伤流液是指在苦瓜收获结束时，将其主茎在一定高度切断后，在其切口处收集的流出液。因其不影响苦瓜收成，可作为苦瓜资源综合利用的途径。目前

3、，关于苦瓜肉、苦瓜籽提取物的降糖活性已有大量报道，而对苦瓜伤流液的药理活性却研究甚少，除本课题组有相关报道外[8]，在国内外仍是空白。本文利用苦瓜伤流液为原料，采用喷雾干燥制成干粉，研究其对链脲霉素诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用，并进行急性毒性试验研究，为苦瓜伤流液的利用提供试验依据。　　1材料　　1.1原料与试剂新鲜苦瓜伤流液，采自江苏省扬中市国家级苦瓜种植示范区;链脲霉素，美国Sigma化学试剂公司产品;二甲双胍(分析纯)，上海华氏制药有限公司;血糖测定试纸，美国强生公司产品;肝糖原、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品;麦芽糊精(DE=18)(

4、食用级)，上海化学试剂公司产品。　　1.2动物与饲料降血糖试验动物：健康ICR雄性小鼠，体质量(25±2)g，由扬州大学比较医学中心提供(动物合格证号SCXK苏2007-0001)。急性毒性试验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(23±2)g，由南京江宁试验动物中心提供(动物合格证号SCXK苏2002-0018)。饲料：小鼠基础饲料，由南京安立默科技有限公司提供。　　1.3仪器与设备B-290小型喷雾干燥机，BUCHI公司产品;TOUCHI血糖监测仪，美国强生公司产品;R4冷冻离心机BR4i，法国JOUAN公司产品;B040234全自动酶标仪，芬兰Thermo公司产品;UV-210

5、0分光光度计，上海优尼科公司产品。　　2方法　　2.1苦瓜伤流液采收苦瓜收获后，取苦瓜藤茎，傍晚时分，在距地面80cm高度将苦瓜藤茎剪断，并将顶部插入接收瓶中，塞紧瓶口，将瓶绑扎固定，次日傍晚可接收到450ml左右的苦瓜伤流原液。收集的液体过滤、混合均匀，放阴凉处备用。　　2.2苦瓜伤流液喷干粉的制备新鲜苦瓜伤流液→离心去杂质→低温真空浓缩→喷雾干燥(麦芽糊精作为助干剂，助干剂与苦瓜伤流液固形物含量的比例为2∶1)→苦瓜伤流液喷干粉(SDMBS)→干燥保存备用。　　2.3STZ糖尿病小鼠模型的建立健康ICR雄性小鼠60只，适应性喂养1周后，随机分为2组，第1组10只为正常对照组，第

6、2组50只为造模组。造模时小鼠禁食不禁水16～17h后，按170mg/kg体质量腹腔注射STZ溶液(STZ临用前用柠檬酸缓冲液冰浴避光配制成1%的浓度)[9，10]。72h后禁食3～5h，断尾取血测血糖值，血糖值在11.1mmol/L以上的为高血糖造模成功小鼠[11]。　　2.4SDMBS对STZ糖尿病小鼠的降血糖试验以正常小鼠为正常对照组，将用STZ诱导成功的糖尿病小鼠按平均血糖值随机分成模型对照组、二甲双胍组(200mg/kg)、SDMBS低剂量组(450mg/kg)、SDMBS高剂量组(900mg/kg)。正常对照组和模型组对照组每天灌胃0.4ml生理盐水。试验小鼠连续灌胃3

7、0d，1次/d。末次给灌胃后禁食3h，断尾取血测血糖值;采用摘眼球取血并分离血清测总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白含量;取肝脏测肝糖原含量。　　2.5急性毒性实验为避免小鼠灌胃剂量超过小鼠最大耐受剂量，本实验将苦瓜伤流液直接冻干粉用于小鼠急性毒性实验，再按比例换算成喷干粉。在预试验的基础上，初步估算小鼠死亡率为0%和100%时剂量范围，按以下公式求出公比r。r=n-1b/aa：最小剂量(死亡率为0%)b：最大剂量(死亡率为100%)n：正式试验中小鼠组数实验时，每组1