胡芦巴降血糖成分分析及降血糖作用机制研究

《胡芦巴降血糖成分分析及降血糖作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、胡芦巴降血糖成分分析及降血糖作用机制研究StudyonHypoglycemicComponentsofFenugreekanditsHypoglycemicMechanism作者姓名：姜文月专业名称：药物分析研究方向：药物分子与生物分子相互作用研究指导教师：刘忠英教授学位类别：医学博士培养单位：吉林大学药学院论文答辩日期：2015年5月26日授予学位日期：年月日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位周余来教授吉林大学主席周义发教授东北师范大学崔勐研究员长春应用化学研究所委员宋凤瑞研究员长春应用化学研究所黄百渠教授东北师范大学刘志强研究员长春应用化

2、学研究所孟繁浩教授中国医科大学李平亚教授吉林大学卢建忠教授复旦大学刘忠英教授吉林大学中文摘要胡芦巴降血糖成分分析及降血糖作用机制研究胡芦巴为豆科植物胡芦巴的干燥成熟种子，在亚洲、地中海和非洲国家被广泛种植并用于食品、保健品领域，胡芦巴具有降血糖活性的报道由来已久，但降血糖活性物质及降血糖作用机制众说纷纭，尚未定论。胡芦巴中含量最高的3类化学组份依次是多糖(胡芦巴胶)、皂苷、黄酮，含量分别为20%~25%、4%~8%、1%~2%，本文对胡芦巴中这三类组份开展纯化制备研究、化学成分分析、系统性的降血糖活性研究，并通过胰岛组织形态观察、血清胰岛素水平测定、肝糖原含量测定、肌

3、糖原含量测定、体外α-葡萄糖苷酶活性抑制实验、HepG2胰岛素抵抗实验以及代谢组学实验，对其降血糖作用机制进行深入的研究，阐明胡芦巴降血糖药效物质及作用机理。主要研究内容分为以下5个方面：1.胡芦巴黄酮组份的制备及成分分析采用石油醚超声脱脂、70%乙醇溶液热回流法从胡芦巴中提取黄酮类物质，提取率为1.45%；采用聚酰胺树脂与D101大孔吸附树脂联合过柱纯化，制备胡芦巴黄酮组份，总黄酮含量为62.28%，组份得率为1.42%；采用超高效液相色谱-线性离子阱质谱联用(UPLC-LTQ/MS)对胡芦巴黄酮组份进行成分分析，结果95%的组份峰被推断鉴定出来，为19个黄酮类化合

4、物。2.胡芦巴皂苷组份的制备及成分分析采用石油醚超声脱脂、70%乙醇溶液热回流法从胡芦巴中提取皂苷类物质，提取率为9.02%；采用DM130大孔吸附树脂过柱纯化，制备胡芦巴皂苷组份，总皂苷含量为78.56%，组份得率为6.05%；采用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱联用(UPLC-QTOF/MS)对胡芦巴皂苷组份进行成分分析，结果90%的组份峰被推断鉴定出来，为55个皂苷类化合物。3.胡芦巴多糖组份的制备及单糖组成分析以水为溶剂冷浸法从胡芦巴药材药渣(皂苷或黄酮提取后剩余的药渣)中提3取多糖，以提取率及纯度为考察指标采用L9(3)正交设计优化溶剂倍数、提取次数、

5、提取时间等工艺参数，确定胡芦巴多糖组份最佳制备工艺为：50倍量水10°C温度下磁力搅拌提取3次，每次1.0h，12000r/min离心收集上清液，70%I乙醇醇沉，适量水复溶后冻干，该条件下制备的多糖组份纯度为98.54%，得率为24.12%；采用毛细管电泳(CE)测定胡芦巴多糖组份的单糖组成，确定其单糖组成比为：甘露糖/半乳糖(M/G)=1.08：1。4.胡芦巴组份降血糖活性及作用机制研究首先，利用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病(DM)大鼠模型，分别考察胡芦巴黄酮、皂苷、多糖组份对糖尿病大鼠的降血糖作用。结果表明，胡芦巴黄酮、皂苷、多糖组份均表现出良好的降血糖效果，

6、证明三者均是胡芦巴降血糖活性物质，其中，黄酮、皂苷组份能够更好地下调空腹血糖(FBG)，并抑制糖尿病大鼠体重下降；对于提升口服葡萄糖耐量(OGTT)，三个组份作用效果相当；仅皂苷组份能一定程度上减少糖尿病大鼠死亡，改善生存状态，综合各项指标分析而知，胡芦巴黄酮、皂苷组份降血糖效果优于多糖组份。而后，通过检测胰岛组织形态、血清胰岛素水平、肝糖原含量、肌糖原含量，并结合体外α-葡萄糖苷酶活性抑制实验、HepG2胰岛素抵抗实验，研究胡芦巴降血糖活性物质的降血糖作用机制，结果表明，(1)黄酮组份通过修复受损胰岛、促进胰岛素分泌、增加肝糖原含量、抑制α-葡萄糖苷酶活性、改善胰岛

7、素抵抗等途径发挥降血糖作用；(2)皂苷组份通过修复受损胰岛、增加肝糖原和肌糖原含量、抑制α-葡萄糖苷酶活性、改善胰岛素抵抗等途径发挥降血糖作用；(3)多糖组份通过增加肝糖原含量、抑制α-葡萄糖苷酶活性、改善胰岛素抵抗、延缓糖吸收(OGTT结果推论)等途径发挥降血糖作用。3个组份比较而言，只有黄酮组份能促胰岛素分泌，且能更好地抑制地α-葡萄糖苷酶活性；皂苷组份较其它两个组份相比，能更好地增加肝糖原、肌糖原含量，更有效地改善胰岛素抵抗；多糖组份较其它两个组份相比，由于高粘度特性，能有效延缓糖吸收。最后，采用超滤质谱技术(ultrafiltrationMS