慢性低氧高二氧化碳对小鼠骨骼肌形态的影响

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1、慢性低氧高二氧化碳对小鼠骨骼肌形态的影响：包绍智，房春燕，王小同，李笑蓉，张大贵【摘要】目的:观察慢性低氧高二氧化碳小鼠股外侧肌显微、超微结构的变化，探讨慢性低氧高二氧化碳对小鼠骨骼肌形态的影响。方法：将C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组，实验组建立慢性低氧高二氧化碳小鼠动物模型。观察两组体重变化；光镜观察小鼠股外侧肌细胞形态、炎性细胞、脂肪细胞等变化；透射电镜观察肌纤维走向、形态及线粒体损害等超微结构变化。结果：与对照组比较，实验组小鼠体重下降（P＜0.05）；肌纤维局部萎缩，肌纤维排列紊乱；炎性细胞浸润，脂肪沉积增多；肌细胞线粒体增多伴内部结构明显破坏。结

2、论：慢性低氧高二氧化碳血症可导致小鼠的肌纤维萎缩和线粒体损害，伴有炎性细胞浸润。【关键词】低氧；高碳酸血症；骨骼肌；显微结构；超微结构；小鼠Abstract:Objective:Toobservethechangesofpathologicmorphousandultrastuctureinthevastuslateralisofmiceexposedtochronichypoxia-hypercapnia.Methods:C57BL/6micelyintocontrolgroupandexperimentgroup.Animalmodelofchronichypo

3、xia-hypercapniaentgroup.Musclecellsandinflammatorycellsicroscopy.Theultrastureofmusclecellandmuscle’smitochondriaicroscope.Results:parediceentgroup（P＜0.05）.Inexperimentgroup，musclesatrophyandderangement，inflammatorycellsinfiltrationandincrementoffattydepositionberofmitochondriaentgroup

4、.Conclusion:Miceexposuretohypoxia-hypercapniacaninducetheirmusclesatrophy，muscles’mitochondriadestroyandinflammatorycellsinfiltration.Keyuscle；microstructure；ultrastructure；mice慢性阻塞性肺疾病（COPD）是以不完全可逆的气流受限为特征的肺部疾病，但越来越多的研究表明，COPD的病变还累及多个肺外器官。骨骼肌功能障碍是其较为突出的肺外病变之一，它严重影响COPD患者运动能力和生活质量。其发病机

5、制仍不清楚，估计病因主要集中在肌纤维的再分布和能量代谢酶活性改变等方面[1]。本实验模拟COPD发病机制，观察在常压慢性低氧高二氧化碳条件下，小鼠股外侧肌显微、超微结构变化，旨在探讨低氧高二氧化碳对骨骼肌形态学改变的影响。1材料和方法1.1动物与分组SPF级C57BL/6雄性小鼠（由温州医学院实验动物中心提供），体重20～28g，6～8周龄，按随机数字表法分为实验组和对照组，每组8只。1.2试剂与仪器TEAI10透射电子纤维镜（PHILIPS公司），超薄切片机（LKB公司），戊二醛（分析纯，日本），四氧化锇（分析纯，南非），EPON812(分析纯，日本)，苏木素，伊

6、红（北京中杉公司），其余为国产分析纯。1.3低氧高二氧化碳小鼠模型的建立参照陈鸣和等[2]建立的方法。1.4骨骼肌标本取材两组动物成模后，称体重，予1%水合氯醛腹腔麻醉后处死，取小鼠右侧股外侧肌2份，1份行常规HE染色，1份电镜超薄切片。1.5光镜切片的制备和观察组织经4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，8μm切片。切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗，苏木素染色2min，以1%盐酸酒精分化30s，流水冲洗返蓝25min，0.5%伊红染色5min，行常规脱水、封片。在HPLAS1000彩色图像处理系统下对骨骼肌炎症细胞浸润、骨骼肌纤维断裂、坏死、脂肪沉积、肌膜核内移等

7、进行观察。1.6电镜超薄切片的制备和观察将骨骼肌标本用锋利刀片修成1mm3组织方块，以2.5%戊二醛电镜专用固定液固定2h，PBS缓冲液冲洗1次，1%锇酸后固定60min，行常规脱水、浸透、包埋、超薄切片、铅铀染色。TEAI10透射电镜下观察取得图像，也在图像分析系统下对骨骼肌肌纤维排列、肌纤维萎缩、纤维溶解和线粒体等进行观察。以上光镜和电镜下观察操作均由同一位病理医生在不知道实验分组的情况下进行，参照Cross[3]方法评分以0为无明显损害，+为轻微的损害，++为中度损害，+++为重度损害为标准进行评判，每张图像均重复观察2次保证实验可重复性和病理诊断的正确性