六味地黄汤对雌性致衰模型小鼠生殖器官影响的实验研

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1、六味地黄汤对雌性致衰模型小鼠生殖器官影响的实验研【摘要】目的观察六味地黄汤（LethodsToestablishsenilitymodelthroughsubcutaneousinjectionofD-galactogenintotheneckandbackofmice,orphology.ResultsLiuprovethecontentofβ-endorphin,increasethecornifiedandepithelialcellandepidermalcellinthevaginalexfoliatedcellsmear

2、ofmice.ConclusionLiuefunctionasestrogen,alfunctioningofovariabyregulatingtheus-hypophysis-ovarianaxis.　　Keyatureovarianfailure,POF)是指卵巢功能提前衰退，表现为妇女40岁之前非生理性的月经停止，伴有潮热、原发及继发不孕、全身和生殖器萎缩，卵泡刺激素(follicularstimulatinghomone,FSH)升高(FSH>40IU/L)及E2下降。目前病理机制不甚清楚，而建立POF动物模型对其病

3、因的基础研究以及指导临床的诊断和治疗有重要意义。由于半乳糖血症患者常表现为原发性闭经或卵巢早衰，且有报道动物体内的半乳糖增多可引起类似与卵巢早衰的改变，故本课题组采用D-半乳糖建立小鼠卵巢早衰动物模型［1］，通过观察LPUSCX31显微镜；德国原装进口mICROMGMBHHm200切片机；CSˉ摊片机。电子体温计，DT一ITB型;电子天平，JD2000-2;Y～计数器，GAMMA-C120。　　2方法　　2.1衰老动物模型的建立　　采用D-半乳糖亚急性衰老模型建立法。D-半乳糖按每只小鼠经背部皮下注射D-半乳糖0.3ml/（kg·d

4、），注射42d。　　2.2实验分组　　　　将60只小鼠随机分成正常对照组（A）、衰老模型组(B)、六味地黄汤治疗1组(C)，六味地黄汤治疗2组(D)，乙烯雌酚组(E)，每组12只。A组、B组各鼠每天灌胃生理盐水20g·kg-1，同时B组，C组，D组，E组各鼠每天经背部皮下注射D-半乳糖0.3ml·kg-1，连续给药42d。从11天开始，C组，D组分别灌服六味地黄汤（原汁1g/ml浓度）20g·kg-1·d-1或40g·kg-1·d-1，E组乙烯雌酚0.7mg·kg-1·d-1灌胃，连续给药32d。　　2.3观察指标及方法　　2.3.

5、1动情周期的测定给药两周，逐只连续观察受试动物外阴部、阴道上皮脱落细胞动情周期变化。用消毒棉签插入小鼠阴道约0.5cm，轻轻转动后取出，将棉签上的阴道脱落细胞均匀涂于洁净的载玻片上，待涂片自然风干后用碱性美蓝溶液染色5min，然后用蒸馏水冲洗，自然风干后镜检，观察细胞形态，确定动情周期。每日下午定时阴道涂片、H-E染色，细胞学检查。　　2.3.2P，E2，β-内啡肽检测各组连续灌胃治疗2周后，称量体重并在大鼠动情间期，按放射免疫药盒操作说明测定β-内啡肽及雌、孕激素的含量。每只鼠取血清200μl，血清量不足的动物将血清合并后检测。成

6、批检测P，E2,β-内啡肽，留样时要求用1%肝素和抑肽酶抗凝，迅速低温4℃离心，取血浆低温－20℃保存待测。　　2.3.3生殖器官体质量观察42d采血后断头法处死动物，摘取子宫、卵巢，剔除脂肪和其他组织，滤纸稍拭后，分别放入电子分析天平精确称出湿重。　　2.3.4形态学观察分组编号并浸入10％福尔马林固定、包埋、切片、HE染色、封片，进行组织学观察。　　2.3.5统计学处理:用SPSS13.0进行统计处理,统计学方法为样本均数的T检验。　　3结果　　3.1小鼠阴道脱落细胞涂片的影响小鼠性周期一般为5d。灌胃2周检测,除了E组有不同程

7、度延长(5～6d)外，其余各组周期均不相同。表现为B组与C组周期紊乱，长短不一。D组与A组周期基本稳定为4～5d。在灌胃4周检测,A组周期无明显改变、仍表现为4～5d；而其余各组均有明显改变，表现为D组周期延长至6～7d；E组延长至7～8d；C组基本趋于正常，表现为4～5d；B组周期仍不规则。结果显示，D,E组与A组角化上皮细胞最高值及表层细胞最高值比较差异显著(P<0.05)，C组与A组比较无显著差异(P>0.05),C,D,E组与B组比较有显著统计学差异(P<0.05)。　　考虑是雌激素水平增高的表现，雌激素的

8、作用是上皮增生、细胞成熟。其影响程度一般以角化细胞指数为依据。说明六味地黄汤可以提高雌激素水平，使其角化上皮细胞和表皮细胞增多。　　3.2给药2周血清雌激素(E2)、孕激素(P)水平及β-内啡肽（EP）含量的变化　　结果见表1。表1各