六味地黄汤生物制剂对肾阴虚小鼠脾t淋巴细胞亚群的影响

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1、六味地黄汤生物制剂对肾阴虚小鼠脾T淋巴细胞亚群的影响胡旭光，臧建伟，唐春萍，杨超燕，赵越【摘要】　　目的观察六味地黄汤生物制剂对实验肾阴虚小鼠脾T淋巴细胞亚群的影响，并与传统六味地黄汤进行比较。方法用甲状腺素和利血平建立肾阴虚小鼠模型，模型小鼠在服用药物1周后，称体重和计算脾脏指数，采用流式细胞仪测定脾脏T淋巴细胞亚群表达。结果六味地黄汤生物制剂对肾阴虚模型小鼠脾T淋巴细胞亚群CD4/CD8比例有提高作用，与传统六味地黄汤组比较存在显著性差异（P0.05）。结论六味地黄汤生物制剂对肾阴虚模型小鼠T淋巴细胞亚群具有显著的调节作用，可

2、提高机体的细胞免疫功能，其作用优于传统的六味地黄汤。【关键词】六味地黄汤生物制剂；肾阴虚；T淋巴细胞亚群　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofLiuice.MethodsNIHmiceg/kgdosageofthyroxin,and1mg/kgdosageofreserpine,onceadayforcontinuingsevendays.Fivegroupsofmicealgroupandmodelgroup.Thechangesofbodyandspleenindexeseasuredan

3、dtheexpressionofCD4andCD8onTcellsurfaceinspleencellsetry.ResultsLiumuneregulationeffectandissuperiortothetraditionalLiuouseCD3-APC，RatantimouseCD4-FITC，RatantimouseCD8-PE，AbDserotec，批号20070123。　　1.2六味地黄汤（Ll，备用。　　1.3六味地黄汤生物制剂的制备（PSB-Ll。　　1.4动物NIH种小鼠，体质量(20±2)g，雌雄各半，由广东

4、省实验动物中心提供（合格证号:2006A017）。　　1.5方法　　1.5.1六味地黄汤生物制剂对肾阴虚小鼠体重、脾脏重量指数的影响将小鼠60只随机分为5组，每组12只，分别为空白对照组、模型组、六味地黄组、光合细菌组、六味地黄汤生物制剂组。除空白对照组外，其余各组动物灌胃给予甲状腺素150mg/kg体重和利血平1mg/kg体重，1次/d，连续7d。与此同时，各组动物灌胃给予相应药物或对照物（见表1），1次/d，连续7d。第8天处死动物称体重与脾脏的重量，并按照下列公式计算脾脏指数：脾脏指数＝脾脏湿重（g）/小鼠体重（g）。　　1

5、.5.2六味地黄汤生物制剂对脾T淋巴细胞亚群的影响在无菌条件下剖开小鼠腹腔取脾，称重，研磨过100目筛网，PBS液冲洗，收集分离的脾细胞悬液，2000r/min离心8min，弃上清液；加红细胞裂解液2ml，混匀脾细胞，静止4～5min，待红细胞完全破碎，2000r/min离心8min，弃上清液去除红细胞，PBS液洗2遍，用PBS重悬细胞，计数调整细胞浓度为106个/ml。加荧光抗体CD3-APC,CD4-FITC,CD8-PE各10μl，暗处孵育30min，用流式细胞仪计数CD3,CD4,CD8数目。　　2结果　　2.1六味地黄汤

6、生物制剂对肾阴虚小鼠体重、脾脏重量的影响结果表明肾阴虚模型组动物体重、脾脏指数低于空白组；六味地黄汤及其生物制剂可以显著提高小鼠的体重与脾脏指数，且六味地黄汤生物制剂优于传统的六味地黄汤。结果见表1。表1六味地黄汤生物制剂对肾阴虚小鼠体重、脾脏重量的影响（略）　　2.2六味地黄汤生物制剂对脾T淋巴细胞亚群的影响结果表明肾阴虚模型组小鼠脾脏T淋巴细胞CD4/CD8比值与空白组比较显著下降；经六味地黄汤及其生物制剂治疗后，T淋巴细胞CD4/CD8比值显著提高且六味地黄汤生物制剂优于传统的六味地黄汤(P0.05)。结果见表2。表2六味地

7、黄汤生物制剂对肾阴虚小鼠的CD4/CD8的影响（略）　　3讨论肾阴虚主要表现为机体多脏器的衰老、免疫功能低下及内分泌的紊乱〔2〕，肾阴虚小鼠免疫器官内的淋巴细胞凋亡,细胞数目减少〔3〕；脾脏体积缩小,重量减轻,免疫器官出现萎缩，六味地黄汤对肾阴虚引起的脾脏萎缩有拮抗作用，表明六味地黄汤对免疫具有明显的调节作用〔4〕。本次实验结果表明光合细菌代谢六味地黄汤能明显增加模型小鼠的体重及免疫器官脾的重量，且优于传统的六味地黄汤。　　脾T淋巴细胞具有多种生物功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促进丝裂原的应答反应

8、以及产生淋巴因子等〔5〕，对体内一切体液和细胞免疫反应类型及强度都有重要的调节作用。在T淋巴细胞中，起主要作用的是CD4亚群和CD8亚群。CD4代表T辅助细胞，可诱导和辅助细胞毒性T细胞前身成熟为细胞毒T细胞并增强B细胞产生抗体，调节免疫反应的活性