重组人生长激素对肠缺血再灌注大鼠肠壁iga浆细胞凋亡及p53基因表达影响的实验研究

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1、重组人生长激素对肠缺血再灌注大鼠肠壁IgA浆细胞凋亡及P53基因表达影响的实验研究作者：刘海波孙少川郑春宁姜永胜谭伟【摘要】目的：探讨肠缺血再灌注损伤时应用重组人生长激素（rhGH）时肠壁IgA浆细胞的凋亡及P53基因的表达的影响。方法：将60只免疫组化双染试剂盒（购自福建迈新公司）。按试剂盒指示方法进行IgA浆细胞和凋亡、IgA浆细胞和P53双重染色。免疫细胞的计数：应用01ympusBX50多头显微镜及北京天地公司的病理细胞图像分析系统对切片进行观察和IgA浆细胞凋亡及其P53表达计数。显微镜放大倍数为40×10倍，屏幕图像面积为2

2、3.0cm×17.5cm，每个切片找3个富含免疫组织化学双染细胞的视野，计数免疫组织化学双染细胞数目。1.4统计学方法数据均以x±s表示，应用SPSS10.0进行方差分析和相关性分析，P＜0.05有统计学意义。2结果2.1两组IgA浆细胞凋亡观察IgA浆细胞凋亡双重染色示，凋亡的IgA浆细胞胞浆和胞膜着色呈蓝紫色或绿色，胞核着色呈棕黄色。实验组与对照组相比，第2、4、6天IgA浆细胞的凋亡均减少（P＜0.05），以第6天最明显；实验组与对照组第6天IgA浆细胞的凋亡均显著高于第2、4天（P＜0.01）。见表1表1对照组与实验组IgA浆细

3、胞第2、4、6天凋亡数量比较（略）2.2两组IgA浆细胞中P53表达IgA浆细胞及P53双重染色示，IgA浆细胞着色部位为胞浆和胞膜，呈蓝紫色或绿色，P53着色部位为胞核，呈红色。实验组与对照组相比，第2、6天IgA浆细胞中P53的表达均减少（P＜0.05）。2.3IgA浆细胞内P53的表达与凋亡的相关性P53表达与IgA浆细胞的凋亡呈正相关（r=0.812,P＜0.05）。表2对照组与实验组IgA浆细胞第2、4、6天表达量比较（略）3讨论人体能够抵御细菌和内毒素的侵袭而不受伤害，是因为存在肠黏膜上皮、肠道免疫系统、肠道正常菌群、肠道内

4、分泌及蠕动组成的肠道屏障，有效地阻挡着其向肠外组织和器官的移位。其中，肠道免疫屏障在应对创伤、手术、应急及严重感染中的作用越来越被重视。免疫屏障由分泌型免疫球蛋白A（SIgA）和肠道T淋巴细胞组成，其中，SIgA［1］为机体抵抗外来病源微生物的第一道防线，其可以与细菌病毒等结合，阻止吸附在黏膜上，并且可以中和毒素，避免毒素对机体的侵袭。SIgA是由IgA单体通过J链连接而成的二聚体，主要由肠黏膜固有层浆细胞产生，因此IgA浆细胞在肠道屏障中占据重要的地位。肠缺血再灌注是严重创伤、休克后救治过程中可能发生的一个共同的病理生理阶段，在严重感

5、染、创伤、休克、心肺功能不全以及小肠移植的病理演变过程中起重要作用。肠缺血再灌注导致肠道屏障的损害，细菌和毒素移位，从而引起全身炎症和多器官功能不全。在此过程中，伴随着肠道免疫屏障的损害，SIgA分泌减少，使肠道抵御病原体和毒素侵袭能力下降导致肠源性感染；同时，由于SIgA分泌减少，使其对某些抗原物质的封闭作用减弱导致部分T淋巴细胞活化，激活炎性细胞因子，产生过度炎症反应损伤肠黏膜，引起全身炎性综合征［2］。在肠缺血再灌注对肠道免疫屏障的影响过程中，凋亡是一个重要的机制［3，4］。生长激素（GH）是垂体前叶分泌的一种蛋白质激素，其人工制

6、备产品重组人生长激素（rhGH）已广泛应用于临床。rhGH能够调控肠道屏障的免疫能力，保护肠道屏障。GomezdeSegura［5］用rhGH治疗放射性损伤大鼠时发现，应用rhGH7d后，其死亡率和细菌移位明显降低，认为与rhGH增强肠道免疫能力，刺激肠黏膜上皮再生有关。孙少川等［6］在研究rhGH对大鼠肠缺血再灌注肠黏膜免疫屏障中免疫细胞的影响时发现，rhGH可以改善肠道免疫屏障中CD3+、CD4+、CD8+T细胞及IgA浆细胞的数量及比例，增强肠道免疫屏障的功能。在本实验中，应用rhGH后的第2、4、6天，肠壁IgA浆细胞的凋亡的数

7、量较对照组明显减少，并且以第6天最为显著，这说明rhGH能够抑制IgA浆细胞的凋亡，作用可能在第6天最明显；实验组与对照组第6天IgA浆细胞凋亡的数量均较第2、4天明显增多，表明缺血诱导凋亡，再灌注加剧凋亡，随着再灌注的进行，凋亡亦在增加；实验组第6天IgA浆细胞凋亡的数量较第2、4天亦增多，我们认为rhGH虽然抑制凋亡，但不能完全制止凋亡的进展，同时考虑与rhGH的剂量及应用时间有关。P53基因是肿瘤抑制基因，同时也是凋亡促进基因，参与细胞生长、分化与死亡。在正常小肠组织中P53基因表达几乎缺乏，但损伤后，P53表达型增强的程度几乎与

8、凋亡细胞的分布一致［7］。本实验的结果显示，应用rhGH后的第2、6天，肠壁IgA浆细胞中P53的表达较对照组明显减少，并且以第6天最为显著，这说明rhGH能够抑制IgA浆细胞中凋亡基因P53表达。P53表