elisa检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的分析

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1、ELISA检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的分析何怡吉林省四平市中心血站，吉林四平136000[摘要]目的探讨ELISA检测中全自动加样引起拖带假阳性现象的原因以及所要采取的对策。方法别使用试剂检测筛查血液标本，然后根据检测试剂说明书的要求，在全自动样本处理系统控制微机上编辑程序，程序包括初检和复检。使用一次性探针和永久性探针的污染情况对比，再使用2种标本进行3孔复检，在进行判断是否为强阳性所引起的拖带污染现象。结果整个检测过程中，以HIV检测为例所检测的7324份血液检测中出现拖带假阳性现象的为2例，而2013年1月—2014年5月间共检测血液标本66085份，没有出现拖带假阳

2、性现象。结论一次性加样探针的使用能够很好的减少甚至杜绝拖带假阳性污染现象的发生，在检测过程中由于不同的厂家的试剂有所区别，在设计加样参数时应该遵循科学合理的原则，检测仪器要定期进行检验维修，校准，同时对于血液标本要严格质量控制，提高检测的准确性和安全性，使得全自动检测设备的优势充分。[.jyqkin，15min的离心处理。1.2试剂初检用采用上海科华生物工程股份有限公司提供的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒，规格:576人份/盒，剂型:诊断试剂盒，批准日期:2012-12-6，批准文号:国药准字S20103010药品类型:生物制品英文名称:ELISA；复检时采用人类免疫缺陷病毒抗体诊

3、断试剂盒，50人份/盒，剂型：剂盒诊断试剂盒，批准日期：2013-10-5，批准文号：国药准字S20030035，名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1/2)抗体诊断试剂盒(胶体金法)。所有的试剂在使用时都要保证产品质量合格，而且在有效期内。1.3仪器设备本次研究所使用的仪器是瑞士STAR全自动样本处理系统，型号为FAME全自动酶免分析系统，型号为SUNRISE酶标仪，型号为MK2的洗板机。1.4方法试剂1和试剂2分别检测初检标本和复检标本，使用检测试剂时严格按照试剂的说明书进行，首先在全自动的样本处理系统控制微机上进行编程，所编程序包括初检、复检的加样程序，2012年采用永久性加样探针

4、，加样的过程中，将不同的血液标本和液体试剂进行吸收和分配，程序设定中需要将加样探针进行清洗，清洗次数为3次，然后擦拭1次，2012年之后的所有检测都使用一次性加样探针，相应的在程序设定是也应该将洗涤和擦拭步骤去除。等加样程序完毕，然后将微板移到全自动酶免分析系统进行温育，洗板，显色，结果判读等。96孔酶标板的纵裂采用A-H来表示，酶标板的横列1-12表示，于是标本的在酶标板的位置可以表示为：A1-A12，以此类推，详见表1.如果在微板上发现A-H排中任意一排连续出现2个或者2个以上的孔显示的是阳性，那么结果很可能就是拖带假阳性现象，这种情况时首先将统一检测的初检复检结果进行比较，然

5、后在使用备用的血袋导管标本、初检标本、复检标本采用2种试剂行3孔复检。1.5统计学方法采用excel表格进行数据的处理和统计，计数资料用百分数表示。2结果在检测中2012年8~12月份的血液标本中出现拖带假阳性现象的2次，2013年1月—2014年4月所检测的血液标本中没有出现拖带假阳性现象。详见表2、3。第1例出现在酶标板H2……H7的位置，H2标本检测OD值分别为2.759和2.543都是强阳性，H3标本OD值为0.403和0.456弱阳性。第二例出现在同一块酶标板的E9……E12，其中E9，检测OD值3.187和3.112显示为强阳性。其他均显示为阴性。3讨论本次研究结果显示

6、，再使用一次性探针之后没有出现拖带假阳性现象，而使用了永久性探针时则出现了2次拖带假阳性污染现象，探针的选择会影响ELISE检测结果。全自动加样系统优点很多，因此很多血站都在使用。前几年人们在检测血液样本时采用的是永久性加样探针，虽然这种检测方法会出现拖带现象，但是由于资金或者技术的限制，因此一部分血站仍在使用，由于血液标本和试剂加样后，按照预先设置的程序实施冲洗和擦拭，在进行使用，因此在加样过程中的运行方向由左至右各个孔之间时，会不可避免的拖带，在加样探针刚完成一个强阳性的标本加样之后，而标本中有纤维蛋白凝块残留，在程序冲洗和擦拭之后没有冲洗未达标，那么就会造成拖带假阳性的现象。

7、本次研究中2例拖带假阳性污染现象的出现都是由于在处理标本时方法不得当所致，永久性钢针存在不科学合理的情况，由此导致加样量有误差、加样针上存在挂珠、清洗探针槽不干净、钢针内壁外壁的密封性不好、溢液通道不够通畅、探针内栓漏气等等情况，最终就会出现拖带假阳性现象的出现。本次研究结果和闫晓鹏,李雪英,王文莉[1]等人的研究结果保持一致。我们经过认真分析和研究探讨，建议在进行ELISA检测时为了避免拖带假阳性现象应该做出如下改进：①不同厂家的试剂分别设置科学合理的几样参数，在血