传统热补针法对实验性关节炎家兔外周镇痛机理的研究

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1、传统热补针法对实验性关节炎家兔外周镇痛机理的研究：刘世琼,秦晓光,杜小正,骆文郁　摘要:目的：观察传统热补针法对实验性关节炎家兔模型的镇痛效应和外周镇痛机理。方法：将健康的2～3月龄青紫蓝家兔50只在测定痛阈后，按随机表分组法分为正常对照组、模型对照组、内服药物对照组、捻转针法对照组、热补针法治疗组5组，每组9只。以卵蛋白诱导关节炎疼痛模型。对正常对照组、模型对照组家兔每天进行抓取、固定刺激，其余3组进行连续治疗。6d后，比较各组家兔膝关节组织中β内啡肽（βEP）、亮啡肽（LEK）、前列腺素E2（PGE2）含量的变化。结果：经治疗后，各治疗组家兔在痛阈提高的同时

2、，膝关节组织中的PGE2、βEP、LEK含量有明显改变。其中热补针法组膝关节组织中的PGE2显著降低，βEP、LEK显著升高，其作用优于内服药物组和捻转针法组（P<0.05或P<0.01）。结论：传统热补针法有显著的外周镇痛效应。　　关键词:关节炎；热补针法；外周镇痛机理　　1材料与方法　　1.1动物选择　　选择健康的2～3月龄青紫蓝兔５0只，体重2.5±0.5kg，雌雄各半，由卫生部兰州生物制品研究所实验动物中心提供。合格证号：2004-018。动物在实验前适应性饲养1周并进行动物痛阈测定以进行筛选。其标准是：痛阈在1.80mA左右，能引起缩腿反应

3、的应用于实验，少于1.30mA或大于2.30mA者，表示动物反应过敏或迟钝，弃之不用。　　1.2实验方法　　1.2.1动物分组　　实验开始前，将动物适应性喂养7d，然后按随机数字表分组法将动物随机分为正常对照组、模型对照组、内服药物对照组、捻转针法对照组、热补针法治疗组５组，每组9只。　　1.2.2动物模型的复制　　除空白对照组外，其他各组均进行造模。造模方法参照有关文献〔1〕。于实验正式开始前3d用脱毛剂脱去家兔的双后腿膝关节周围和背部肩胛骨间的毛。将4mg/mL的卵蛋白溶液与等量弗氏完全佐剂（CFA）混匀，充分震荡成乳化剂。在肩、背部选6个点，每点皮下注射该

4、溶液0.2mL。14d后以相同剂量重复皮下注射1次。第二次免疫后6d，在家兔的双膝关节分别注入20mg/mL卵蛋白生理盐水溶液0.4mL。观察到家兔精神委靡、懒于活动，关节肿胀、行动缓慢、双膝关节肿胀为造模成功。　　1.2.3选取穴位　　根据临床经验并考虑到实验可行，选取双侧合谷、足三里穴。穴位的定位，参照《实验针灸学》“家兔常用针灸穴位定位标准”而定。合谷在前腿掌背侧第1、2掌骨间，约相当第2掌骨中点桡侧；足三里在小腿背外侧上1/5折点处，约相当腓骨头下1.2cm、胫骨嵴后1cm处。　　1.2.4处理方法　　A、正常对照组：不造模，从实验第27d开始，每天用与

5、其他治疗组的相同方法刺激、固定1次，每次30min，连续6d。　　B、模型对照组：造模成功后，从实验第27d开始，每天用与其他治疗组的相同方法刺激、固定1次，每次30min，连续6d。　　C、内服药物对照组：造模成功后，从实验第27d开始喂服痹冲剂，0.56g/次（按体表面积折算的等效计量，相当于人体常规用量的4.9倍），用蒸馏水按1∶5的比例调成水糊状进行灌胃，3次/d，连续6d。　　1.2.5观察指标及检测方法　　1.2.5.1痛阈　　在治疗6次后的第2d测痛阈。检测方法参照有关文献〔3〕，在右膝关节表面安装含有饱和氯化钾溶液的电极，无关电极接在右前肢，两极

6、与in，取其平均值作为痛阈。　　1.2.5.2膝关节局部的βEP、LEK　　测定痛阈后，将各组家兔经耳缘静脉注射25%乌拉坦8mL麻醉。取膝关节周围带皮组织，迅速置沸腾生理盐水中煮沸5min，用滤纸吸去水分；准确称取200mg。然后移至玻璃匀浆器中，加入1mol/L的HAc溶液2mL，再将匀浆器置于0℃冰水浴中匀浆15min，静置2h；再加入1mol/L的NaOH溶液2mL，振荡均匀后将匀浆液移至低温离心管中；经4000r/min、-4０C低温离心20min，取上清液2mL，置于-20℃低温冰箱冷冻保存待测。采用放免法测定βEP、LEK含量。检测方法参照药盒所附

7、说明书,由兰州大学第一医院核医学科测定。　　1.2.5.3膝关节局部的PGE2　　测定痛阈后，将各组家兔经耳缘静脉注射25%乌拉坦8mL麻醉。取膝关节周围带皮组织，用滤纸吸去血渍；准确称取200mg。然后移至玻璃匀浆器中，加入无水乙醇1mL，再将匀浆器置于0℃冰水浴中匀浆15min，静置2h；然后加入生理盐水3mL，振荡均匀后，将匀浆液移置低温离心管中；经4000r/min、-4℃低温离心20min，取上清液2mL，置于-20℃低温冰箱冷冻保存待测。采用放免法测定PGE2含量。检测方法参照药盒所附说明书,由兰州大学第一医院核医学科测定。　　1.3实验数据的统计方

8、法　　实验数据均采用均数