应用荧光原位杂交法检测乳腺癌石腊样本中her

《应用荧光原位杂交法检测乳腺癌石腊样本中her》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、应用荧光原位杂交法检测乳腺癌石腊样本中HER【摘要】目的探讨荧光原位杂交法（Fluorescenceinsituhybridization,FISH）检测乳腺癌HER2基因扩增在临床病理诊断及分子靶向治疗中应用的可能性。方法用FISH技术和免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）技术检测50例乳腺导管癌石蜡包埋标本并比较两种方法的结果以及与临床病理的关系。结果16/50例HER2蛋白表达阳性，其中强阳性5例，中度阳性9例，弱阳性2例；11/50（22%）例乳腺癌标本FISH技术检测HER2基因扩增阳

2、性，其中5/5为免疫组化HER2蛋白强阳性病例；6/9为中度阳性病例，其中1例为17号染色体多倍体与HER2基因扩增。HER2基因扩增与蛋白表达与乳腺癌转移有关（P<0.05）。结论FISH技术可稳定地检测用IHC确定的HER2蛋白阳性乳腺癌中HER2基因的扩增状况，并用于临床赫赛汀分子靶向治疗病例的筛选。【关键词】HER2/癌基因；荧光原位杂交；乳腺癌　　ApplicationofFluorescentinSituHybridization(FISH)toDetecttheAmplificationofH

3、ER2GeneinParaffinSampleofBreastCancer　　Abstract：ObjectiveToexplorethepossibilityofapplicationethodtodetectamplificationofHER2genebyfluorescenceinsituhybridization(FISH)inclinicalpathologyandmoleculartargetingtherapyinbreastcancer,andinvestigatetherelationshipbetp

4、lificationandclinicopathologicaldata.MethodsDetecting50casesofformalinfixedandparaffinembededbreastductalcarcinomasamplesparedmunohistochemistryandthenanalyzedapresentedpositiveforHER2protEinexpression,including5strong,9moderateand2plification,inoderatelypositiv

5、eexpressionforHER2protEInbyimmunohistochemistry.AndtheoneplificationofHER2geneandpolysomyofchromosome17oderatelypositiveexpressionfortheprotein.BothgeneamplificationandproteinexpressionofHER2etastasisoflymphnodes(P<0.05).ConclusionFISHtechniquecanstablydetect

6、theamplificationofHER2geneespeciallyforthepositivecasesforHER2proteinanditisclinicallyusefultoselectthecasesformoleculartargetingtherapyofHerceptininbreastcancer.　　Key厚切片,二甲苯脱蜡，100%乙醇脱二甲苯后空气干燥或45～50℃烤片2～5min。0.2NHCL20min，经纯水充分洗涤后，2×SSC缓冲液洗片3min；1MNaS（异硫酸氰钠）80℃30m

7、in（温度要求准确）,纯水及缓冲液洗片后，将组织片放入蛋白酶溶液37℃10min（250mg/500ml0.01NHCL）。纯水洗涤后,切片入中性福尔马林10min。2×SSC缓冲液洗，45℃～50℃2～5min干燥切片；处理后的切片进入72℃变性液5min；经75%、85%、100%酒精各1min，空气中干片；滴加10μl探针混合液在组织片靶区域，上盖18×18mm盖玻片并用蜡胶封边。放入原位杂交仪中,37℃过夜（14～18h）。将切片置后洗液（2×SSC，0.3%NP40）中漂浮盖玻片，组织片入后洗液72℃2min后将

8、其放置在室温暗处干燥，滴加10μlDAPI显色液在组织片靶区域，盖玻片封片，荧光显微镜观察结果。　　1.2.2免疫组化技术常规切片、脱蜡入纯水。组织片放入EDTApH8.0修复液在高压锅内高压2.5min。0.01MPBS液洗片后入3%H2O210min。充分洗涤后加入一抗37℃60min