一年蓬挥发油的气相色谱质谱分析及体外抑菌活性研究

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1、一年蓬挥发油的气相色谱质谱分析及体外抑菌活性研究【摘要】　　目的对一年蓬中挥发油成分进行气相色谱-质谱联用分析，并进行初步的体外抗菌活性研究。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用气相色谱-质谱联用方法对其进行成分鉴定，同时用面积归一法测定其含量。以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为代表菌种，对一年蓬挥发油进行抗菌活性研究。结果共鉴定出29个化合物，占挥发油总量的85.99%，主要成分有：烯烃类，如β-莰烯、β-广藿香烯、β-蒎烯等；芳香醇、酮、醛、酚类化合物，如a-松油醇、顺茉莉酮、安息香醛、百里酚等。体外抑菌活性

2、表明，一年蓬挥发油对两种试验菌种有明显的抑制作用。结论该实验为进一步开发利用一年蓬资源提供了重要的科学依据。【关键词】一年蓬挥发油气相色谱-质谱抑菌作用　　一年蓬Erigeronannuus(Linn.)Pers.为菊科飞蓬属植物，生长于山坡、路边及田野中，原产美洲，在国内广泛分布。主要功能为消食止泻，清热解毒，截疟。主治消化不良、胃肠炎、疟疾，毒蛇咬伤［1～2］。TakeyoshiIijima［3］及李新等［4］对一年蓬的化学成分研究表明其主要为萜类及甾类成分，其挥发油类成分尚无报道。本文采用常规的水蒸

3、气蒸馏法提取其挥发油，利用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）对其挥发油成分进行定性定量分析，同时以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为代表菌种，对一年蓬挥发油进行抗菌活性研究。本研究为进一步开发和利用一年蓬提供了科学依据。　　1仪器与材料　　VarianCP-3800/Saturn2200型气相色谱-质谱联用仪（美国）；金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus，大肠杆菌Escherichiacoli由南京师范大学微生物研究所提供；培养基为LB培养基；所用试剂都为国产分析纯。一年蓬采于江苏南京地区，由南

4、京师范大学生命科学学院龚祝南教授鉴定为飞蓬属植物一年蓬Erigeronannuus(Linn.)Pers.。　　2方法　　2.1挥发油的提取将新鲜一年蓬全草晾干后粉碎，称取100g粗粉，用水蒸气蒸馏法提取其挥发油，馏出物用石油醚萃取得浅黄色液体，得率为0.3%（V/S分析采用GC-MS对该挥发油进行成分分析。色谱条件：VF-5ms毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm），载气为氦气，流速1ml/min；分流比10∶1，进样量1μl；程序升温60℃保持2min，以15℃/min升至260℃，保持10m

5、in；进样口温度260℃。质谱条件：离子源为Ei源，电压70ev，质量数范围为50～1000。检索谱库：NIST谱图库。　　2.3一年蓬挥发油抗菌活性研究　　2.3.1平板培养法测定抗菌活性少许挥发油溶于生理盐水（含5%吐温-80）中，配成一定浓度梯度测试液。阳性对照为青霉素钠（福建汇天生物医药公司）。　　将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌接种于平皿中的LB培养基上，培养24h，培养基打孔，孔内加入测试液。分别为挥发油溶液，溶剂对照和阳性对照。培养24h后，测量孔外抑菌圈的毫米数。　　2.3.2比浊法测定最低抑菌

6、浓度（MIC）在灭菌的培养管中加入5ml经灭菌的液体LB培养基，用微量移液器吸取挥发油原液，使挥发油浓度倍比稀释为10%，5%，2.5%，1.25%，0.625%，0.3125%系列浓度。各加入20μl菌悬液，于37℃，100r/min振荡6h后，以未接种的培养液加空白溶剂作对照，测定培养液在600nm处的消光值。　　3结果与分析　　3.1一年挥发油的成分分析图1为一年蓬中挥发油的总离子流图。采用NIST库对被分析物的组分的质谱进行检索，按照面积归一化法计算各化合物在挥发油中的相对含量。结果见表1。　　表

7、1一年蓬挥发油的化学成分分析结果（略）　　3.2一年蓬挥发油的抑菌活性测定　　3.2.1平板法抑菌结果表2中可以看出，一年蓬挥发油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都有明显的抑菌效果，形成明显的抑菌圈。在原液至1/8浓度范围内，两菌株间抑菌圈比较显示出统计学差异（P<0.05）。且挥发油浓度越大，抑菌圈直径越大，挥发油浓度与抑菌效果呈正相关。浓度相同时，对大肠杆菌形成的抑菌圈直径大于对金黄色葡萄球菌形成的抑菌圈直径，实验表明对大肠杆菌的抑菌效果更加显著。　　表2一年蓬挥发油抑菌圈测定结果（略）　　3.2.2

8、比浊法抑菌结果由图2，3可知，比浊法测定一年蓬挥发油对金黄色葡萄球菌的MIC为10%挥发油原液；对大肠杆菌的MIC为5%挥发油原液。　　图1一年蓬挥发油的总离子流图（略）　　4结论　　本实验结果说明，一年蓬挥发油对革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌中的大肠杆菌都有明显的抑菌作用，并对大肠杆菌的抑菌作用更好。在对一年蓬挥发油的主要成分分析鉴定过程中，发现其主要成分为烯烃类、芳香醇、酮、醛、酚类等化合物。以上结果为进一步