新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究

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1、新生小鼠睾丸组织异体异位移植物中精子形态及功能的研究　　　　　　作者：张芳婷，于洁，蔡志明，房家智，万汇涓，叶静，尹美【关键词】睾丸组织；异体异位移植；精子；卵胞浆内单精子显微注射；新生小鼠　　摘要：目的采用卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术探讨新生小鼠睾丸组织异体异位移植到裸鼠体内后所生成精子的受精能力。方法将含有原始生精细胞的新生1-2d小鼠睾丸组织异体异位移植到BALB/c-nu/nu免疫缺陷小鼠背部皮下。8周后取出移植物，通过常规染色和电镜技术对生精小管中生精细胞组成和形态进行观察；以薄层明胶水解法检测精子顶体蛋白酶活性；采用ISCI技术检测移植物中具有成熟

2、形态精子的受精能力。结果移植物的HE染色发现，新生小鼠睾丸组织在裸鼠体内已启动并进行精子发生过程，生精小管中含有包括精子在内的所有类型生精细胞；移植物组织经处理后，可计数到具有镰刀头状的长尾精子约1×103个/mg移植物；透射电镜标本中观察到的精原细胞和精母细胞均具有正常超微结构；薄层明胶水解法检测可观察到顶体蛋白酶呈阳性反应的精子；ICSI结果显示，单纯ICSI处理组与ICSI+电激活组均有受精和卵裂现象发生。结论仅含有原始生精细胞的新生小鼠睾丸组织在异体异位移植到裸鼠体内后，可以产生形态正常并具有受精能力的精子。　　关键词：睾丸组织；异体异位移植；精子；卵胞浆内单精

3、子显微注射；新生小鼠　　Functionalstudyofspermatozoaderivedfromneonatal　mousetestesgraftedintoimmunodeficientmice　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethefertilizationabilityofspermatozoaderivedfromneonatalmousetestesgraftedintoimmunodeficientmicebyintracytoplasmicsperminjection(ICSI).MethodsNeonatalKunm

4、ingmousetestescontainingprimitivespermatogeniccellsastheonlygermcellsice.Graftsatogenesisingraftsentedbyhistologicalanalyses.Theultrastructureofspermatogeniccellsingraftsissionelectronmicroscopy.Theactivityofacrosomalenzymeofspermatozoaatozoainedbyusingintracytoplasmicsperminjection.Resu

5、ltsHistologicalanalysisshoatogenesisinthegraftsafter8atozoaalmorphologicalappearancein1mgsuspendedgrafttissueatogoniaandspermatocytesalultrastructureatozoaplicatingtheactivityofacrosomalenzymeofthespermatozoa.Cleavagesulationgroup.ConclusionSpermatozoaalmorphologyandfertilizationabilityc

6、anbedevelopedbyallograftingneonatalmousetestesunderthebackskinofimmunodeficientmice.　　KEYedia产品；孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)分别购于天津生物制品研究所和上海生化制药厂；卵培养用CZB培养液、1.7mmol/L氯化锶激活液以及精子处理液为QUINNS产品。　　1.3方法　　1.3.1组织移植和移植物标本采集参照　　2.3卵胞浆内单精子显微注射经超排卵和处理后获MII期卵母细胞54枚。单纯ICSI组15枚，ICSI加电激活组39枚。实验发现，ICS

7、I加电激活组的受精率为43.6%，其中观察到2原核2极体共9枚，随后观察到2细胞17枚、4细胞12枚以及8细胞1枚；单纯ICSI组受精率为20.0%，出现2原核并排出极体的时间比ICSI加电激活组晚10h左右，随后观察可见2细胞3枚；4细胞1枚(图3)。　　图1移植物的组织形态学及超微结构观察（略）　　Fig.1Morphological,histologicalandultrastructuralobservationongrafts　　A:falciformheadedmousesperm(red↑)inthegrafts(×100)