组织芯片技术在乳腺癌相关指标检测中的应用

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1、组织芯片技术在乳腺癌相关指标检测中的应用【摘要】目的:探讨组织芯片免疫组化方法在乳腺癌相关指标检测中的应用。方法：采用组织芯片免疫组化和传统免疫组化的方法分别检测了183例和30例乳腺癌组织中MMP2，MMP9，MMP13的表达水平。结果：组织芯片免疫组化染色与传统免疫组化染色不存在统计学差异（P>005）。结论：高通量组织芯片免疫组化的方法在乳腺癌相关指标检测中可一次对多个样本进行多指标检测，大大节省了人力、物力和财力，值得进一步推广使用。【关键词】组织芯片；免疫组化；乳腺癌【ABSTRACT】Objective:Toin

2、vestigatetheapplicationofMicroarrayimmunohistochemicaltechniqueinthedetectionoftheindexcorrelatedmunohistochemicaltechniqueandtraditionalimmunohistochemicaltechniquein183patientsand30patientsmunohistochemicaltechniquehasnosignificantdifferenceparedmunohistochemicaltec

3、hnique.（P>005）.Conclusion:HighfluxMicroarrayimmunohistochemicaltechniquecandetectseveralindexesformanysamplesonetimeinthedetectionoftheindexcorrelatedanpoaterialsandfinancialresources.Itismunohistochemicaltechnique,Breastcancer组织芯片(tissuemicroarray，TMA)是将多个微小组织片汇集在

4、一张固相载体上所形成的组织微阵列生物芯片，简称组织芯片。TMA克服了传统病理学技术步骤繁琐、试验速度慢和效率低的缺点，具有小体积、多样本、大信息、可同时分析数百种组织样品的优点。本研究中我们采用组织芯片免疫组化的方法检测了183例乳腺癌组织中MMP2，MMP9，MMP13的表达水平，同时采用传统免疫组化的方法对其中30例进行相同指标的检测，并对其阳性率进行比较，目的是为组织芯片免疫组化方法在乳腺癌相关指标检测中的应用进一步提供理论依据。1材料与方法11材料试验组：天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理科1993年手术切除乳腺癌石蜡包埋标

5、本183例。年龄24~75岁，平均4926岁。浸润性导管癌124例，浸润性小叶癌28例，其他类型癌31例。临床分期Ⅰ期22例，Ⅱ期93例，ⅢⅣ期68例。组织学分级I级67例，Ⅱ级57例，Ⅲ级59例。有淋巴结转移者97例，无淋巴结转移者86例。对照组：于183例中按>10%的抽样比例随机选取30例作为对照组。12方法121制作组织芯片①HE切片于显微镜下明确并标记癌巢。②借助HE切片于供体蜡块的相应部位进行标记作为取材部位。③组织芯片模块制作：将普通病理石蜡熔化，反复沉淀3次，加入3%精制蜂蜡，制作40cm×20cm×10cm

6、大小的空白蜡块，室温冷却。④组织芯片的设计和制备：设计10×8点组织列阵，用打孔机制成模块，用直径06mm的打孔针从供体蜡块的选定部位逐个取出组织芯，随即放入预先设计的阵列模块中，排列成组织芯片模块，将制成的组织芯片模块置于60℃温箱中50min，轻压模块使组织芯在模块中排平。将制成的模块常规切成4μm的切片裱于硅化玻片上，60℃温箱过夜。122对照组切片制备将病理蜡块切成4μm的切片裱于硅化玻片上，60℃温箱过夜。123采用免疫组织化学SP法检测鼠抗人MMP2，MMP9，MMP13单克隆抗体均购自北京中杉生物技术有限公司。SP试

7、剂购自福州迈新生物技术开发有限公司，按说明书要求做抗原热修复处理。用己知阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。13阳性结果判断标准结果判断按Shimizu方法[1]，对每张切片阳性细胞的阳性强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别打0、1、2、3分，着色阳性面积按无着色、着色<1/3、1/3～2/3、>2/3分别打0、1、2、3分，然后根据两项打分之和判断其结果：0分为阴性，≥3分为阳性，其中5分者为强阳性(注：每张切片选择有代表性的区域，在400倍视野下进行计数，共计5个视野，取其平均值以避免随

8、意性)。14统计学方法组织芯片免疫组化染色与传统免疫组化染色阳性率的比较采用行×列表进行χ2检验，α值等于005为显著检验水准。用SPSS130统计软件进行分析。2结果　实验组MMP2染色阳性141例，阳性率为770%；MMP9染色阳性120例，阳