五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究

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1、五鹤续断多糖的提取及动态分布规律的研究【摘要】　　目的以恩施州道地药材——五鹤续断为原料，初步研究其多糖提取分离及其动态分布规律。方法采用石油醚脱脂、热水浸提、乙醇沉淀分离、sevage脱蛋白、冷冻干燥等方法提取分离续断多糖，并采用蒽酮比色法测定续断多糖的含量，了解其多糖的动态分布规律。结果在提取2次、加料液比为1∶20、提取时间2h、提取温度为95℃时，续断多糖得率最高，三年生续断根多糖分布最高。结论五鹤续断多糖分布规律为：三年生根＞两年生根＞一年生根＞叶，人工种植的续断根＞野生根。【关键词】五鹤续断多糖提取分离分布规律　　Abstract：ObjectiveToextrac

2、tandseparatepolysaccharideinDipsacusasperandextractpolysaccharideandstudyitsregularities.MethodsDuringtheextractionofpolysaccharide,theeffectsofextractiontimes,temperature,proportionandtimeonyieldofpolysaccharideinvestigatedbyorthogonalexperiment.Theseparationprocedureofprecipitationtheremov

3、ingprotEinsandfatsinedbyanthronecolorimetry.ResultsTheresultsshoumparametersesextractionratioofmaterialsolvent1:20,thetime2h,thetemperature.　　Keyin后，于80℃下烘至恒重，将各样品用粉碎机打成粉末，过60目筛，装于试剂瓶中，贴上标签，置于干燥器内贮存备用。　　1.2仪器与试剂　　植物样品粉碎机，756MC-紫外分光光度计，RE-52型旋转蒸发器，Hl，分别置于试管中，沿壁缓慢加入5ml冷的蒽酮溶液，混合均匀后，在试管口盖上玻璃塞，在沸

4、水浴上加热10min后，在流水中冷却20min，在620nm波长处以试剂空白作参比，测定吸光度，根据回归曲线查出样品中多糖的浓度。　　3结果　　3.1五鹤续断中续断多糖的提取　　3.1.1石油醚脱脂将实验所要用的五鹤续断样品粉末准确称量后，用滤纸包好置于索氏提取器中，80℃恒温水浴回流6h后，挥干石油醚即可脱去样品中的脂。在石油醚脱脂的过程中，回收的溶液颜色由深变浅，说明此过程还具有脱色的作用，同时也说明其中的部分色素是脂溶性的物质。　　3.1.2确定五鹤续断中续断多糖的最佳提取工艺用人工种植的三年生五鹤续断根作为实验材料，以确定其最佳提取工艺。　　影响续断多糖提取率的因素很多

5、，如料液比、温度、时间以及提取次数等，为综合分析各因素的影响程度，本实验采用4因素3水平正交实验［5］L9（34），以确定续断多糖的最佳提取工艺。实验方案设计见表1。表1影响续断多糖提取因素实验水平表（略）　　根据因素水平表1，按正交实验L9（34）浸提。将浸提液过滤、浓缩后，浓缩液加无水乙醇沉淀，4℃静置过夜后离心(5000r/min，15min)，Sevage试剂去蛋白，冷冻干燥，得续断粗多糖,重复实验3次，正交实验设计与实验结果见表2。经直观分析，初步筛选出续断多糖提取工艺的最佳水平组合为A2B3C2D2。表2续断多糖提取正交实验L9（34）结果（略）表3续断多糖提取方差

6、分析表（略）　　由表2极差分析和表3方差分析可以看出，各因素对续断多糖提取的得率影响大小为B>A>C>D，其中料液比在α=0.05达到显著水平，故续断多糖提取的最佳组合为A2B3C2D2，即提取2次、料液比为1∶20、提取时间2h、提取温度95℃为最佳提取工艺。　　3.2续断多糖的分离纯化　　3.2.1确定乙醇分级沉淀多糖的最佳体积本实验采用乙醇作为多糖沉淀剂，将提取所得续断多糖溶液浓缩后，在最优水平下以1∶1，1∶2，1∶3，1∶4，1∶5(浸提液:无水乙醇，V/V)进行分级沉淀，4℃静置过夜后离心(5000r/min，15min)，冷冻干燥，得到不同体积比

7、的5种续断粗多糖。结果见表4。表4不同浓度乙醇沉淀多糖结果比较（略）　　比得率以多糖得率最高者为100%。　　从表4续断粗多糖得率可知，乙醇体积越大，粗多糖得率越高，当滤液与乙醇体积比由1∶4增加到1∶5时，沉淀多糖量几乎保持稳定状态，因此，采用乙醇沉淀多糖时，选用滤液与乙醇体积比为1∶4。　　3.2.2Sevage法去蛋白本实验采用Sevage（氯仿-正丁醇，体积比4∶1）试剂去除粗多糖中的蛋白质。将上述所得的粗多糖充分溶解后，转入到分液漏斗中，加入等体积的Sevage试剂，剧烈振荡5mi