万古霉素发酵液凝聚与絮凝研究

《万古霉素发酵液凝聚与絮凝研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、万古霉素发酵液凝聚与絮凝研究【摘要】对凝聚与絮凝法预处理万古霉素发酵液的工艺进行了研究，初步选用三种凝聚剂、三种絮凝剂，以滤速、沉淀物重量、滤液澄清度、滤液中万古霉素含量以及万古霉素液相色谱峰面积占总积分面积百分比为指标，考察凝聚剂与絮凝剂的作用效果。从中选择偏铝酸钠、壳聚糖，并详细研究其用量、pH对预处理效果的影响，结果显示偏铝酸钠为较合适的凝聚剂。进一步讨论了搅拌时间对凝聚效果的影响，通过正交试验确定了最佳凝聚工艺条件为：pH4，偏铝酸钠用量750mg/L，搅拌时间6min。【关键词】万古霉素偏铝酸钠壳聚糖凝聚絮凝Stud

2、yoncoagulationandflocculationofvanycinfermentationbrothABSTRACTCoagulationandflocculationprocessofvanycinfermentationbrothinethEireffectsonthepretreatmentprocess.Thefactorsincludingfiltrationrate,precipitationmetaaluminateandchitosanentbycoagulant/flocculantconcent

3、rationandpHvaluemetaaluminateentseeffectedthecoagulation.Theoptimalcoagulationprocessconditionentandtheparametersinedasfollometaaluminate,750mg/L;stirringtime:6min.KEYmetaaluminate;Chitosan;Coagulation;Flocculation万古霉素是一种糖肽类抗生素，由微生物发酵法生产，是治疗由金葡球菌引起的严重感染的首选药物之一，临床

4、上多使用其盐酸盐。万古霉素发酵液预处理技术对后续分离纯化工艺操作以及产品的收率和质量有较大的影响，目前国内、外针对此工艺的报道较少。凝聚和絮凝能有效改变细胞及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，提高过滤速率，有效除去杂蛋白和固体杂质，提高滤液质量［1］。凝聚与絮凝方法操作简便易行，能耗低，所用设备及药品成本低廉，与超滤等其它方法相比较，有独特的优势，符合国内实际情况，是工业上常用的发酵液预处理方法。凝聚作用是指在某些电解质作用下，使扩散双电层的排斥电位降低，破坏胶体系统的分散状态，使胶体粒子聚集的过程［2］。本研究

5、使用的硫酸铝、氯化铁、偏铝酸钠(NaAlO2)是常用的凝聚剂，也有报道用偏铝酸钠对循环冷却水进行处理效果较好［3］。絮凝作用是指在某些高分子絮凝剂作用下，悬浮粒子之间产生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程［2］。本研究使用的聚丙烯酰胺、聚乙二醇、壳聚糖是常用的絮凝剂，其中壳聚糖是一种天然无毒的有机高分子絮凝剂，国内有很多关于用壳聚糖处理发酵液的研究［4～6］。1材料与方法1.1材料与试剂万古霉素发酵液由本实验室提供；硫酸铝、氯化铁为天津市化学试剂三厂产品；偏铝酸钠天津大学化工厂(配成26%水溶液)提供；聚丙烯酰胺为天津市元

6、立化工有限公司(配成1%水溶液)产品；聚乙二醇由天津市四通化工厂(配成1%水溶液)生产；水溶性壳聚糖由天津市光复精细化工研究所(配成0.5%水溶液)提供。所用试剂均为分析纯。1.2主要仪器JA21002型电子天平为上海精天电子仪器有限公司产品；pHS3Cl发酵液置100ml烧杯中，调节pH值，加入凝聚剂或絮凝剂，搅拌，于100ml量筒中静置2h。(2)抽滤吸取静置后的上层发酵液20ml弃去，将剩余发酵液摇匀，抽滤，测滤速，以单位时间抽滤所得滤液体积计算，并观察滤液清亮程度。(3)沉淀物重量测定将滤饼干燥称重，减去干燥滤纸空重

7、，计算沉淀物重量。(4)万古霉素含量测定将抽滤所得滤液稀释五倍，用高效液相色谱法［7，8］测定万古霉素含量。2结果与讨论2.1凝聚剂与絮凝剂的初步筛选(1)凝聚剂与絮凝剂的加入对原始发酵液预处理效果的影响原始万古霉素发酵液的pH值约为8.9，按照经验用量加入不同凝聚剂与絮凝剂，作用效果明显(表1)。加入凝聚剂与絮凝剂后，滤速、沉淀物重量、万古霉素HPLC峰面积占总积分面积的百分比以及滤液澄清度均有不同程度的提高；除加入聚乙二醇的试样外，其它试样滤液中万古霉素含量变化不大，这可能是由于含聚乙二醇的试样在絮凝过程中形成的一些絮凝团

8、吸附、包含了少量的万古霉素，使其在抽滤时留在了滤饼中。(2)凝聚剂与絮凝剂的加入对不同pH值发酵液预处理效果的影响为检验凝聚剂与絮凝剂在不同酸碱条件下的作用效果，将发酵液分为三等份，分别调节pH值为3.0、7.0、10.0，凝聚剂与絮凝剂用量不变，结果见表2。由表2可知，pH