两亲性茯苓多糖纳米微球的制备及药物负载性能研究

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1、两亲性茯苓多糖纳米微球的制备及药物负载性能研究【摘要】　　目的研究适用于水体系的羟基喜树碱的负载载体。方法通过化学改性得到十二烷-羧甲基-茯苓多糖，并以此为载体材料，羟基喜树碱为模型药物，采用透析法制备载药两亲性茯苓多糖纳米微球；对纳米微球的粒径、载药量和包封率进行研究，考察其体外释药特性。结果改性后的两亲性茯苓多糖在水溶液中能够自组装成50～100nm左右的纳米微球，在透射电镜下能看见明显的核/壳结构。自制的两新性茯苓多糖纳米微球对羟喜树碱有一定的负载能力，载药量和包封率分别为2.94%和29.4%，并且具有良好的缓释性能，为茯苓多糖的开发与利用

2、提供了可行性依据。结论十二烷-羧甲基-茯苓多糖纳米微球是一个良好的羟基喜树碱的水分散体系。【关键词】茯苓多糖纳米微球取代度药物负载体系　　羟基喜树碱（HCPT），别名羟基树碱、10-羟基喜树碱，是喜树碱类的衍生物，广泛应用于肝癌、胃癌、白血病等多种恶性肿瘤的治疗。但其特殊的理化性质:水不溶脂难溶、内酯环结构不稳定等因素,使得目前临床应用HCPT的疗效并不乐观［1］，开发一种能负载HCPT的高性能药物载体对于抗肿瘤药物输送体系的研究和实际应用均具有重要意义。　　茯苓多糖来源于多孔菌科植物茯苓的干燥菌核，其结构为带有少量(1→6)支链的β-(1→3)-

3、D-葡聚糖，多糖多羟基的结构可以进行多种化学修饰或者高分子聚合，经结构修饰后的茯苓多糖具有较好的水溶性和抗肿瘤活性，若将其作为抗癌药物载体制备成纳米微球，不仅可以负载难溶性抗肿瘤药物，还可能与药物发生协同效应，具有很大的研究价值以及大规模应用和开发前景。　　本实验通过化学改性，制备了两亲性的烷基-羧甲基-茯苓多糖药物载体，并以羟基喜树碱为模型药物，采用透析法［2］制备了载药钠米微球，考察了载药量和包封率和体外释放，为茯苓多糖的进一步开发利用及新型恶性肿瘤靶向给药体系的研制提供基础研究依据。　　1仪器与药品　　紫外分光光度计(Lambda35UV/V

4、ISSpectrometer)；元素分析仪(ElementarVarioEL)；透射电镜(JEM-100CX11)；超声仪（Autoscience?AS2060BUltrasonicCleaner）；恒温振荡箱(THZ-98A，南京昕航科学仪器有限公司)；真空干燥箱(DZF-6020,巩义市英峪予华仪器厂)。　　茯苓多糖（自制），溴代十二烷（AR，国药集团化学试剂有限公司），氯乙酸（AR，国药集团化学试剂有限公司），羟基喜树碱（AR，贵州汉方制药有限公司），其他试剂均为分析纯。　　2方法　　2.1十二烷-羧甲基-茯苓多糖的制备　　2.1.1茯苓多糖

5、Na盐的制备　　配置50%的NaOH溶液，称取一定的茯苓多糖，溶入到50%的NaOH溶液中，充分搅拌溶解，加入等量乙醇，抽滤，再用无水乙醇、丙酮依次洗涤2～3次，在真空干燥得茯苓多糖Na盐。　　2.1.2十二烷-茯苓多糖的制备［3］　　称取自制茯苓多糖Na盐3g，加入到三口圆底烧瓶中，加入异丙醇60ml，充分搅拌分散20min，缓慢滴加9ml的溴代十二烷，在50℃的温度下反应一定时间，充分搅拌。反应完毕后用HAc中和调pH值为6。加入3倍量的无水乙醇使产品析出，充分静置沉淀；抽滤，用80%乙醇洗涤数次，AgNO3检验Br-的存在，洗到溶液不出现白色

6、沉淀为止。再用无水乙醇、丙酮依次洗涤2～3次，得固体粉末，置真空干燥箱干燥。　　2.1.3十二烷-羧甲基-茯苓多糖的制备［4］　　采用二次加碱法制备：称取烷基茯苓多糖1.5g，加入水3ml，乙醇30ml，搅拌分散20min，再加入NaOH0.75g，室温反应4h，加入ClCH2COOH1.8g，搅拌20min，此时测pH值小于7，再加NaOH0.75g，pH大于7，在45～50℃反应6h。反应完毕后用HAc调节pH值为中性。用80%乙醇反复洗涤，用AgNO3检验Cl-的存在，洗到溶液不出现白色沉淀为止。用无水乙醇、丙酮洗涤2～3次，得固体粉末，置真

7、空干燥箱干燥。　　2.1.4红外光谱表征　　将精制的茯苓多糖、十二烷-茯苓多糖、十二烷-羧甲基-茯苓多糖的粉末用KBr压片后在BIO-BADEXALIBURFTS3000红外光谱仪下测定。　　2.1.5烷基取代度的测定茯苓多糖烷基取代度采用元素分析法进行测定，计算公式为：　　DS=（162×a）/(o×a是糖单元中该原子的原子量和，o是取代基团的分子量之和。本文中的取代度定义为每个葡萄糖环上烷基取代基的数量。　　2.1.6羧甲基取代度的测定准确　　称取制备得到的样品，将样品浸泡在盐酸乙醇溶液中（用70%的乙醇配制），搅拌过夜，使羧甲基钠的钠离子完全

8、被H+取代，转变成游离羧甲基酸，离心，水洗到洗液中无氯离子存在（用硝酸银溶液检查），用过量的标准NaOH溶液溶解，此时溶液