凉燥致病机制的实验研究

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1、凉燥致病机制的实验研究【摘要】目的研究凉燥对小鼠的主要致病机制。方法216只无特定病原体级（SPF）昆明小鼠随机分为常温常湿组（A组），常温燥组（B组），凉燥组（C组），每组72只。在模拟凉燥条件下造模，第7天与第14天检测气道与皮肤组织病理、气管纤毛运动、气道液分泌（RS）与气道液IgG抗体（IgGR）、血液流变学、细菌攻击实验与气管细胞bcl-2基因、bax基因表达。结果与A组相比，C组第14天气管、肺与皮肤病变明显，肺细菌数增高，IgGR增高，第7天RS降低（P<0.01），血液流变学影响不明显，但气管细胞bcl

2、-2基因表达下降。结论凉燥伤肺、伤津，致气道“纤毛-黏液毯”局部御邪屏障受损；肺津凝滞于肺，以致宣输失司则皮肤失养。本结果为凉燥致病提供实验资料。【关键词】凉燥致病机制　　Abstract：ObjectiveToinvestigatethepathogeniceffectsofCool-Dryonmice.Methods216Kunmingmice(SPF)almice),groupB(normaltemperatureandOuterDrymice),groupC(Cool-Drymice),72mice/group.Res

3、piratorysecretionofMucopolysacchride(RS),IgGofRespiratory(IgGR)，hemorrheology，BacterialattackingandExpressionofbcl2，baxgeneucus”andreducedtheexpressionofbcl-2gene,echanismsofCoolDry.　　Keyechanism燥气清冷肃降，肃杀收引，“燥气先伤于华盖”，易伤津液。“秋深初凉，西风肃杀，感之者，多病风燥，此属燥凉，较严冬风寒为轻。”外燥有温燥与凉燥

4、之分，但未见凉燥病机系统性实验研究报道。在相关研究中证实外燥致小鼠气道病变的基础上［1］，本文研究凉燥及相兼细菌攻击对小鼠气管纤毛运动、气道液分泌与气道液IgG抗体、血液流变学及气管细胞bcl2基因，bax基因表达等影响，为阐析凉燥致病机制提供资料。　　1材料与方法　　1.1动物　　无特定病原体级（SPF）昆明种小鼠216只，体重（18±1）g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK（鄂）2003-2005。　　1.2仪器与试剂　　LRH250人工智能气候箱（温度：（30～65±1）℃，相对湿度：（30～9

5、0）%±5%，广东医疗器械厂），XSJD恒温倒置显微镜（重庆显微镜厂），CS501超级恒温器（重庆实验仪器厂），756MC紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），FASCO全自动血液流变仪（重庆南方医疗设备公司）。咔唑（批号：054K078，Sigma公司），D-葡萄糖醛酸内酯（批号：2711EC，Sigma公司），四硼酸钠与台氏液试剂、10%甲醛、HE染料（分析纯，批号：050108）上海精细化工科技有限公司。TUNEL试剂盒（MK1020，200503）、bcl2兔抗鼠IgG多抗（BA0412，200503）、

6、bax兔抗鼠IgG多抗（BA0315，200503）和阳性对照片由武汉博士德生物工程有限公司提供。　　1.3菌株　　金黄色葡萄球菌标准菌株(ATCC25923，北京天坛生物制品公司)。　　1.4方法　　1.4.1动物模型及分组　　216只昆明小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、凉燥组，每组72只，分批置人工气候箱内、用昆明种小鼠饲料常规饲养。按表1模拟外燥“温度相对湿度风”条件进行造模。各组第7天和第14天进行检测前4h禁食、禁水。表1各组小鼠“温度－相对湿度－风”处理条件（略）　　1.4.2病理组织学观察　　断颈处死小鼠，

7、常规取气管1.5cm，右肺组织（中）（40±10）mg/只、背部皮肤（0.5cm×0.5cm）及左足垫皮肤，HE染色、镜检。　　1.4.3气管上皮纤毛运动实验（CiliamovementofTrachealEpithelium,CM,min/mm）：按　　1.4.8气管细胞凋亡检测　　第14天取气管切片，按脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）试剂盒程序操作。结果判断：气管上皮细胞核内出现棕黄色颗粒为TUNEL染色阳性。镜下随机计数200个细胞，计算：细胞凋亡率(%)=凋亡细胞数200×100%　　1.4.9气

8、管细胞bcl-2基因，bax基因表达检测第14天常规取气管标本切片、按试剂盒说明书操作。结果判断：气管上皮细胞浆内出现棕黄色颗粒为bcl-2（或bax）表达阳性。镜下计数500个细胞，计算：阳性指数（PI）=阳性细胞数记数细胞数×100%　　1.4.10统计学处