连翘的抗氧化成分研究

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1、连翘的抗氧化成分研究【摘要】目的研究连翘的抗氧化作用，并分离、鉴定连翘抗氧化有效成分。方法用二苯代苦味肼基自由基［1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)］清除实验方法，对连翘的甲醇提取物及其二氯甲烷、正丁醇、水的萃取物进行抗氧化作用评价，并从有效部位分离得到化合物。结果与结论连翘的二氯甲烷萃取物具有很强的清除DPPH自由基的抗氧化活性，并从中分离、鉴定4个化合物，分别为连翘脂素(phillygenin)、连翘苷(phillyrin)、forsythialanA、连翘酯苷(forsytho

2、sideA)。其中，forsythialanA和连翘酯苷(forsythosideA)具有较强的DPPH清除作用，其半数有效值IC50分别为154.05和69.80μg/ml。【关键词】连翘；抗氧化；DPPH；forsythialanA；连翘酯苷　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheantioxidativeactivityofForsythiasuspensaandtoisolateandidentifytheactiveponents.MethodsDPPHradicalscave

3、ngingactivityF.suspensaappearedpotentantioxidanteffectsagainsttheDPPHradical.Fourponentsl,respectively.　　KeyeQ10、GSH等人体内细胞水平形成的抗氧化剂，或如维生素C、维生素E等人体内不形成但通过食物、天然物摄入多种多样的抗氧化剂［11］。但是合成的抗氧化剂，不仅是因为它本身的毒性，还有在高浓度摄取等都可以引起有害身体的问题，而且已有很多研究说明吃药不如通过天然物摄取抗氧化剂，因此越来越多的研究者关心天然抗氧化

4、剂。中药连翘为木犀科连翘属植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实，始载于《神农本草经》，性平，气微香，味微苦，具有清热解毒、疏散风热、消痈散结、强心利尿和降血压之功效，主产于我国东北、华北、长江流域至云南等地，其中以山西晋南，河南豫西所产不但色泽鲜亮且质量佳，为道地药材。连翘是我国常用的大宗药材，主要含有连翘酚(forsythol)、连翘苷(Phillyrin)、连翘苷元(phillygenin)、齐墩果酸(oleanolicacid,OLA)、白桦脂酸(betulinicacid

5、)、乌索酸(ursolicacid,UA)、松脂素(pinoresinol)、甾醇化合物、马苔树脂醇苷(matairesinoside)和多种烃类、醛酮类、醇酯醚类挥发性成分［12］。现代药理研究表明，连翘具有广谱抗菌、抗病毒等作用，对丹毒、颈淋巴结结核、尿路感染、扁桃体炎、肾炎双球菌等均有抑制作用，常用于急性胃炎，呼吸道感染等病症。国内有连翘败毒片、复方鳖甲软肝片、复方金连片、双黄连口服液、复方金银花冲剂等连翘复方制剂。虽然对连翘的抗氧化活性报道了一些，但对连翘的活性氧消除作用及对氧化应激保护作用的活性物质的研究还不

6、多。因此，对糖尿病、癌、动脉硬化、老年痴呆以及老化等诸多疾病起主要因素的氧化应激，进行阐明连翘抗氧化性能，是很有研究意义的。所以，本研究利用体外二苯代苦味肼基自由基［1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)］清除方法，来探讨连翘的抗氧化效果，并分离、鉴定有效成分。　　1材料1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)购自日本eOH加热回流提取3次，每次3h，合并3次提取液，减压浓缩，真空干燥，得甲醇提取干膏84.5g。甲醇提取物用500ml的水混悬，依次用二氯甲烷

7、（3次）、正丁醇（3次）萃取，得二氯甲烷萃取物45.3g。　　2.2连翘抗氧化有效成分的分离取连翘二氯甲烷萃取物(24g)进行硅胶柱色谱，醋酸乙酯-甲醇（100∶1～2∶1）梯度洗脱，薄层色谱配合检识，得到6个组分（Fr.1～6）。Fr.4再经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇（20∶1）洗脱，重结晶，得到化合物1（20mg），2（98mg），3（20mg），4（25mg）。　　2.3DPPH自由基消除活性抗氧化活性是参照连翘甲醇提取物及其不同溶剂萃取物均有浓度依赖性的DPPH消除作用，尤其是二氯甲烷萃取物具有较强的DPPH消

8、除作用（见图1）。如图所示，不同浓度的连翘的甲醇提取物以及其二氯甲烷萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物均显示出剂量依赖性地DPPH自由离子基消除活性（P<0.05）。尤其是二氯甲烷萃取物对DPPH自由离子基的产生具有最强的抑制作用（P<0.05），在100μg/ml浓度就清除75%的DPPH，在各萃取组分中活性最强，可判断