三物黄芩颗粒抗动物ⅰ型变态反应及其机制研究-

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1、三物黄芩颗粒抗动物Ⅰ型变态反应及其机制研究*【摘要】目的运用模型动物观察三物黄芩颗粒的抗过敏作用，并通过其作用环节的影响，初步探讨其抗过敏机制。方法用大鼠被动皮肤过敏法建立Ⅰ型变态反应动物模型，观察反应蓝斑直径；测定血清中总IgE含量；观察颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒情况及对外源性组胺的拮抗作用。结果该颗粒大、中剂量组能非常显著地抑制大鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径（P＜0.05），能够减低致敏大鼠血清中总IgE含量，大剂量组与模型组比较差异有显著性（P＜0.05）。显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可见大、中

2、、小剂量组均有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象，但与模型组比较有所减少。该颗粒大、中剂量组对外源性组胺引起的大鼠瘙痒致痒阈，与正常对照组比较有明显提高（P＜0.01）。结论三物黄芩颗粒能有效对抗Ⅰ型变态反应，具有良好的抗过敏作用。【关键词】三物黄芩颗粒；Ⅰ型变态反应；动物模型；抗过敏三物黄芩颗粒（由黄芩、苦参、生地制备成颗粒剂）源于古方，本课题旨在从实验角度，探讨三物黄芩颗粒的抗Ⅰ型变态反应动物模型作用及其机制，从一个方面为该药的临床提供依据，同时探讨该药治疗Ⅰ型变态反应类疾病的可行性。本次实验在我院动物

3、室（SPF级）进行。实验药物三物黄芩浸膏粉（其颗粒制剂已于2004年获SFDA临床批文）由四川维奥制药有限公司提供，每克浸膏粉含原生药5g，批号：030203。临床拟定剂量为每日8g浸膏粉（40g原生药），按成人一般体重60kg计算，人日用剂量为0.67g原生药/kg。设三物黄芩颗粒大、中、小剂量组（13.4g原生药/kg、6.7g原生药/kg、3.35g原生药/kg)，相当于临床拟定剂量的20倍、10倍、5倍。实验时按20%、10%、5%浓度配制药液，以1ml/100g体重灌胃。1抗Ⅰ型变态反应实验

4、1.1实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重（180±20）g，四川省医学科学院实验动物中心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。1.2实验药物和试剂强的松片：5mg/片，每次5～10mg，每日10～60mg，仙居制药有限公司提供，批号：020257。1%卵白蛋白：中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号F20010702。百日咳三联疫苗：成都生物制品研究所提供，批号20020403。0.5%伊文思蓝溶液：中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号F20020913。1.3实验仪器、设备ACS-3H-

5、B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司；LG10-2.4型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。1.4实验方法1.4.1动物分组动物购回后，取体重160～200g健康SD大鼠50只，按体重随机分为正常对照组、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组5组，每组10只，雌雄各半。1.4.2给药方法正常对照组给予生理盐水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日1次，连续7天。1.4.3剂量设计阳性对照组用强的松5mg/kg，相当于临床剂量的10倍。1.5观察指标及测试方法1.5.1抗血清的制备取

6、健康SD大鼠5只，用1%卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗2×1010/只。12天后，处死大鼠采血，血液以500r/min低速离心，分离血清，此血清置冰箱备用。1.5.2正式实验各组大鼠灌胃给药，每天1次，连续7天。第6天用乙醚浅麻醉大鼠，在其背中线两侧、距脊柱1.5cm处剪光被毛，每侧剪3点，每点间隔1.5cm。取上述含IgE的抗血清，用生理盐水稀释成1∶30、1∶40、1∶50三种不同稀释度，按不同浓度抗血清次序，皮内注射于剪毛的各点，每点0.1ml。第8

7、天进行抗原攻击：尾静脉注射0.5%伊文思蓝溶液1ml，内含卵白蛋白1mg。经20min后，断颈处死大鼠，剪下背部皮肤，检查注射各点的蓝色反应斑直径。1.6实验结果见表1。表1三物黄芩颗粒对大鼠被动皮肤过敏反应的影响（x±s）注：与对照组相比，*P＜0.05；**P＜0.01如表1所示，正常对照组皮斑直径最大，表明造模成功。三物黄芩颗粒大、中剂量组连续给药7天，能显著地抑制各个稀释度抗血清引起的大鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径（t检验，P＜0.05），但不如强的松组（P＜0.01)，并且稀释度越大，抑制越明

8、显。表明一定剂量的三物黄芩颗粒具有明显对抗Ⅰ型变态反应模型的作用。2对Ⅰ型变态反应作用环节的实验2.1对大鼠IgE的影响2.1.1实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重（180±20）g，四川省医学科学院实验动物中心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。2.1.2实验阳性药物和试剂强的松片、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗来源同前。苦味酸由广东台山化工厂生产。2.1.3实验仪器、设备血清总IgE免疫放射分析测定盒：北京北方生物技术研究所提供，批号030