丹参注射液对哮喘大鼠肺il-13和嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响

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1、丹参注射液对哮喘大鼠肺IL?13和嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响王成国,薛克营,程立,李威,石明【摘要】目的:探讨丹参注射液抑制哮喘气道变应性炎症作用的分子机制。方法:30只SD大鼠随机分成正常对照组、哮喘组和丹参治疗组。HE染色行肺组织病理学检查，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数并分类，SP法和RT?PCR测定肺组织中IL?13和嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）表达。结果:丹参组肺组织炎性细胞浸润明显减少，BALF细胞总数及淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组明显减少(P＜0.05，P＜0.01)。哮喘组肺组织IL?13和Eotaxin表达较正常对照组

2、明显增加(P＜0.05)，丹参组IL?13和Eotaxin表达较哮喘组明显减少(P＜0.05)。IL?13和Eotaxin表达呈正相关（r=0.90，P＜0.01）。结论:丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应，其机制可能与降低哮喘大鼠肺内IL?13和Eotaxin表达有关。【关键词】丹参注射液；哮喘；IL?13；嗜酸性粒细胞趋化因子Abstract:ObjectiveToinvestigatethemolecularmechanismofinhibitoryeffectofDansheninjectiononallergicairmationofasthma.MethodsThirtySDr

3、atslydividedintocontrolgroup,asthmagroupandDansheninjectiongroup.Bronchoalveolarlavagefluid(BALF)ed.ThelungtissueeasuredbyRT?PCRandSPmethodofimmunohistochemistryassay.Resultsparedagroup,lessinfiltrationofinflammatorycellsinlungtissuesber,thepercentageoflymphocytes,neutrophilsandeosinophilsinBALFofD

4、ansheninjectiongroupagroup(P﹤0.05,P﹤0.01).TheexpressionofIL?13andEotaxininlungtissueofasthmagroupmationofasthmaticrats,probablybydecreasingtheexpressionofIL?13andEotaxininlungtissueofasthmaticrats.Keya;Interleukin?13;Eotaxin支气管哮喘是由多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与的气道慢性炎症性疾病，其中白介素?13（IL?13）和嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotxin）是致哮喘重

5、要因素。丹参注射液治疗哮喘疗效明显，但其机制不明。本研究通过建立哮喘大鼠模型，检测其肺组织IL?13和Eotaxin的表达，以探讨丹参注射液抑制支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机制。1材料与方法1.1实验动物和药物健康雄性SD大鼠，体重（250±20）g，SPF级（同济医学院实验动物中心）。随机分为正常对照组、哮喘组和丹参治疗组，每组10只。丹参注射液（开开援生制药股份有限公司，2mL/支，含生药丹参1.5g/mL）；卵白蛋白（OVA，美国Sigma公司）；兔抗鼠IL?13多克隆抗体、兔抗鼠Eotaxin多克隆抗体购自武汉博士德生物公司；Trizol（上海华舜生物工程有限公司）；PT?PC

6、R试剂盒（美国Promega公司）；IL?13和Eotaxin　mRNA引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.2动物模型制备哮喘大鼠模型的制备方法参照文献[1]进行。大鼠皮下注射含10mgOVA和200mgAl(OH)3的生理盐水1mL，同时腹腔注射百日咳杆菌疫苗1mL（含菌约6×109个/mL）作为免疫增强剂，第8d重复致敏一次，第15d天开始激发。将大鼠置于特制的玻璃容器内，用超声雾化器喷入2％OVA生理盐水50mL，每次30min，每周3次,连续4周。激发后大鼠出现哮喘症状如躁动不安、咳嗽、呼吸急促、紫绀等，证实模型制作成功。正常对照组用生理盐水代替OVA注射和吸入。丹参治疗

7、组每次OVA激发前30min腹腔内注射20％丹参注射液3mL[2]。1.3BALF细胞计数及分类于末次激发24h后，将大鼠麻醉后（3％水合氯醛）开胸，气管切开，将塑料导管插入右主支气管内，用无菌生理盐水5mL行支气管肺泡灌洗，反复抽吸3次，抽取回收液（即BALF）约4.8mL，回收率96％。取摇匀的BALF少许滴于细胞计数板上，光镜下计数细胞总数，然后将BALF离心（1000r/min）10min，离心后沉渣