肝干细胞研究进展

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1、肝干细胞研究进展【摘要】肝移植是目前治疗终末期肝病的主要方法，但供肝短缺限制了其应用，导致许多患者未能获得肝移植。近年来，肝干细胞的分离鉴定、纯化培养技术日渐成熟，在动物实验和临床研究中均取得了较大进展。移植到受体的干细胞已被证实可以分化形成正常肝细胞，从而通过提高肝细胞数量来改善肝功能，延长了患者生存期，使其有机会获得肝移植。同时为急慢性肝损伤、肝代谢性疾病的治疗提供了新的细胞移植疗法，成为肝病学和干细胞研究领域的热点。【关键词】干细胞肝进展目前肝移植是各类终末期肝病的主要治疗方法。但由于供肝的严重缺乏，大大限制了其

2、广泛应用，很多患者因得不到供肝而死亡。肝细胞移植在等待肝移植的过程中起到桥梁作用，为实现肝移植带来希望。但由于可用于移植的肝细胞数量不足，加之移植后分裂次数少等原因使其纠正肝功能的作用有限，而干细胞的出现恰恰解决了这一难题。干细胞是一类能自我复制增殖并具有分化为多种类型细胞潜能的细胞群，能根据需要通过控制条件使其分化为需要的、代替受损的或病态的细胞，较肝细胞有更小的免疫排斥反应，可更好地达到恢复器官功能、治愈疾病的目的。对肝干细胞的研究已进入临床前期和临床试验阶段，具有重大临床意义和应用前景。1　肝干细胞的分类1.1　

3、胎肝细胞　胎肝细胞是胚胎时期分裂形成肝脏的前体细胞，较成熟肝细胞具有更大的增殖潜能。Dabeva等［1］对14d大鼠胎肝的细胞类型分析发现了一类细胞同时表达肝细胞和胆管细胞标志，可以分化为肝细胞或胆管细胞，因此被认为是肝干细胞的胚胎。Dan等［2］从74～108d人胎肝中分离得到的人胎肝多潜能祖细胞，体外培养，具有强增殖力，并可分化为肝细胞、胆管上皮细胞、脂肪细胞等其他组织的细胞，在移植入肝病动物模型后可分化为有功能的肝细胞并长期存活。由于胎肝细胞易于大量分离培养，因此是很好的移植细胞供体，但由于涉及伦理问题限制了其临

4、床应用。1.2　成体肝内干细胞　对成体肝内干细胞的研究已取得较大进展，已成功分离、培养并移植。其中Farber在研究动物肝癌模型时发现的肝卵圆细胞是最早发现并被认可的一类肝干细胞，其形态特征是细胞小,仅6～8μm，核大，呈卵圆形，核/质比例大，胞质内细胞器少，含少量线粒体和粗面内质网，核内有凝聚的染色质，可同时表达肝细胞和胆管细胞的表面标志如CK-7、CK-8、CK-18和CK-19等。Petersen等［3］发现A6阳性的肝卵圆细胞也表达Thy-1、sca-1、CD34和CD45等造血干细胞标志。2006年Davie

5、s等［4］利用永生化卵圆细胞系PIL-2研究发现环氧合酶COX-2抑制剂SC-236可以诱导卵圆细胞数量减少。同年Suzuki等［5］研究发现IL-15可以明显上调卵圆细胞的累积，增加肝再生能力。最近Szabo等［6］在研究肝再生模型时发现肝卵圆细胞表达Matrilin-2,认为是一种新的卵圆细胞标志。而Jelnes等［7］在研究不同类型的肝再生模型时发现卵圆细胞具有明显的异质性。除卵圆细胞外在成体肝内还发现了其他的肝干细胞。Mitaka等［8］从成体大鼠肝内分离到与卵圆细胞类似的细胞，称为“小肝细胞”，大小是成熟肝细

6、胞的1/3～1/2，呈单核、低分化形态，在培养中形成克隆并分化为有功能的成熟肝细胞。Fujikape［14］认为骨髓的肝细胞是通过细胞融合而不是分化为肝细胞。而Oh等［15］研究发现在一定生理条件下，一部分肝细胞可以来自骨髓，没有发生细胞融合。除骨髓造血干细胞外，骨髓间充质干细胞、基质干细胞也被认为是肝干细胞的。1.4　其他肝外干细胞　目前从许多肝外组织中如胰腺、唾液腺、羊膜和真皮中均发现了可以分化为肝细胞的干细胞。另外胚胎干细胞（embryonicstemcell，ESC）由于具有多潜能，且可以分化为各种细胞，所以也

7、被认为是肝干细胞的之一。2　肝内干细胞的定位和2.1　定位　由于缺乏特异性标志物，卵圆细胞在肝脏中的定位较为困难。干细胞主要位于汇管区、纤维隔和终末胆管树即赫氏管周围。肝脏祖细胞位于门脉周围及整个肝小叶。Burke等［16］认为卵圆细胞存在于门周区和肝实质内。2.2　　肝干细胞与胚胎时期的原始肝内胆管一样均表达肝细胞和胆管细胞的表面标志，因此原始肝内胆管细胞可能是成体肝卵圆细胞的祖细胞。Avital等［12］证实灵长类动物胎肝中存在具有双重表现型的原始肝脏上皮细胞，在体外表达白蛋白、AFP的肝细胞和表达CK-7、CK-

8、19的胆管细胞，因此认为成体肝脏内干细胞是胚胎时期胎肝中的干细胞的遗留。也有许多学者认为骨髓是肝内干细胞的之一，并且在一定条件下如肝损伤时可向肝内运输补充干细胞池，参与肝损伤的修复［17］。3　临床前期研究3.1　肝干细胞的分离纯化培养　因为干细胞数量较少，想分离肝干细胞，首先要使其大量增生，需要建立肝干细胞增殖模型。最早是197