大剂量维生素c对外周血细胞活性的影响

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1、大剂量维生素C对外周血细胞活性的影响：薛美兰张秀珍马爱国姜秀波张金玉【摘要】目的观察大剂量维生素C（VC）对外周血淋巴细胞增殖活性、抗DNA氧化损伤能力以及红细胞膜流动性的影响。方法将48只DA）含量，红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性、红细胞膜流动性、淋巴细胞增殖活性，单细胞凝胶电泳计数彗星细胞测量DNA氧化损伤水平。结果与对照组比较，A组血浆SOD活性明显增高（F=2.987,q=4.24，P<0.05），血浆MDA含量明显降低(F=4.176,q=4.23，P<0.05)，红细胞

2、膜流动性和外周血淋巴细胞增殖活性均明显增高（F=2.278～2.763,q=3.67-3.84，P<0.05）；C组的血浆VC含量明显升高（F=3.235,q=4.63，P<0.01），SOD和红细胞膜GSHPx活性明显降低（F=2.987、3.478,q=3.68～4.13，P均<0.05），MDA含量明显增高（q=4.08，P<0.05）。10μmol/LH2O2诱发DNA损伤B组和C组较对照组均加重（F=4.137,q=3.94、4.25，P<0.05）。结论较高剂量VC

3、（2000mg/kg）可明显增高大鼠机体的抗氧化损伤水平，改善红细胞膜流动性，提高淋巴细胞的增殖活性；当VC剂量超过5000mg/kg时，反而会加重淋巴细胞的DNA氧化损伤。【关键词】抗坏血酸；超氧化物歧化酶；膜流动性；淋巴细胞活化；DNA损伤　　维生素C（VC）是一种水溶性维生素，具有抗氧化活性。一般认为VC是水溶性的，不能在体内蓄积，摄入较高剂量不会对机体产生危害。已知超大剂量服用VC会产生副作用，包括胃胀气、腹泻、呕吐等。有一项体外研究指出，VC抗氧化作用与其剂量有密切关系[1]，过大剂量的VC（0.5

4、mmol/L）可能增加细胞DNA对H2O2或其他有害物质损害的敏感性。目前，健康机体摄入高剂量的VC是否有不良影响尚无定论。本实验通过体内实验对大鼠进行超出生理需要量数倍的大剂量VC干预，观察大剂量VC对健康幼年大鼠外周血淋巴细胞增殖活性和抗DNA氧化损伤能力以及红细胞膜流动性的影响及其可能机制。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1动物分组及处理　　幼年DA）含量以及红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性测定SOD活性测定采用羟胺法，GSHPx活性测定采用DTNB直接法，MDA含量测定采用硫

5、代巴比妥酸比色法。SOD、GSHPx、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。　　1.2.4红细胞膜流动性测定采用Log/L,DPH荧光标记红细胞膜。应用美国PE公司LS50型荧光分光光度计测荧光偏振度，Ex362nm，Em432nm，狭缝10nm，温度25℃，按文献[4]公式计算荧光偏振度P值和微黏滞度η值。　　1.2.5外周血淋巴细胞增殖活性的测定采用ELX2800酶标仪(美国BioTek公司)，四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定。　　1.2.6DNA氧化损伤分析采用单细胞凝胶电泳或彗星电泳技术检

6、测[3]，取新鲜抗凝血30μL，经分离获取淋巴细胞，分别应用0、10、25μmol/L的H2O2氧化处理5min。将DAPI荧光染色的细胞核在荧光显微镜下观察100个“彗星”细胞，根据拖尾的长度衡量DNA链断裂损伤程度（AU）[4]。　　1.3统计学处理　　采用SPSS11.0和PPMS1.5[5]统计软件进行数据处理，数据间比较采用单因素方差分析。　　2结果　　2.1各组血浆VC、SOD、MDA含量和红细胞膜GSHPx活性比较　　与对照组比较，A组血浆SOD活性升高（F=2.987,q=4.24，P<

7、;0.05），MDA含量显著下降（F=4.176,q=4.23，P<0.05）；C组的血浆VC含量明显升高（F=3.235,q=4.63，P<0.01），SOD活性明显下降（q=4.13，P<0.05），MDA含量明显升高（q=4.08，P<0.05），红细胞膜GSHPx活性明显下降（F=3.475,q=3.68，P<0.05）。与A组比较，B组和C组MDA含量明显升高（q=4.73～5.20，P<0.01），SOD活性明显下降（q=3.58～3.65，P<0.05

8、）；C组的血浆VC含量明显升高（q=4.51，P<0.01），红细胞膜GSHPx活性明显下降（q=3.84，P<0.05）。见表1。　　表1各组血浆VC、SOD、MDA含量和红细胞膜GSHPx活性比较（略）　　与对照组比较，F=2.987～4.176，*q=3.68～4.63，P<0.05；与A组比较，#q=3.58～5.20，P<0.05　　2.2各组大鼠淋巴细胞增殖活