欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:9508299
大小:57.50 KB
页数:8页
时间:2018-05-01
《补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的血清药理学研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒作用的血清药理学研究【摘要】:【目的】采用血清药理学方法探讨补肾健脾方体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。【方法】补肾健脾方低、中、高剂量(分别为30.2、60.4、120.8g·kg-1)灌胃正常大鼠制备血清,将含药血清直接添加于体外培养的2.2.15细胞中,培养10d,观察含药血清对2.2.15细胞HBV表面抗原(HBsAg)、HBVe抗原(HBeAg)分泌的影响。【结果】补肾健脾方经体内代谢后能抑制2.2.15细胞HBsAg、HBeAg的分泌,并呈一定的量效与时效关系。
2、低剂量组服药后3h1:4稀释度含药血清的HBeAg抑制率最高,为97.91%;而中剂量组服药后3h1:2稀释度的含药血清则达到抑制HBsAg的饱和量,其抑制率为86.84%。【结论】补肾健脾方具有一定的体外抗HBV作用。【关键词】补肾健脾方/药理学肝炎病毒乙型/药物作用细胞培养血清药理学乙型肝炎病毒(HBV)感染至今仍无较理想、稳定的治疗药物,拉米夫定等核酸抑制剂虽被认为是目前治疗HBV感染最有希望的药物[1],但停药后易复发,并可引起HBV突变,产生耐药性,因而需要寻找更好的抗病毒药物。目前抗HBV药
3、物的体外筛选主要通过药物直接作用于2.2.15细胞,观察其毒性及对HBV表面抗原(HBsAg)、HBVe抗原(HBeAg)分泌的影响来判断[2-3]。但药物直接作用有效并不等于口服吸收经体内代谢后仍有效,因此,本实验采用血清药理学方法来探讨中药复方的体外抗HBV作用,现将结果报道如下。1材料与方法1.1药物补肾健脾方(药材均取自广州中医药大学第一附属医院药剂科)组成:猪苓20g,茯苓20g,白术15g,泽泻20g,黄芪30g,桑寄生30g,仙灵脾12g,葛根30g,苦味叶下珠30g,白花蛇舌草30g,白
4、背叶根30g,山楂15g,丹参20g。按原方的剂量(总药量为302g)常规煎煮,并浓缩成3.02g/mL的浓度。1.2试剂DMEM(GIBCO)培养基(华美生物工程公司),另加入新霉素(G418,由GIBCO提供)0.38g/L,HEPES(缓冲液)2.38g/L;四甲基偶氮唑盐(MTT,由SIGMA公司提供)以DMEM培养基作溶剂配成0.4g/L;二甲基亚砜(广州新港化工厂);HBeAg检测试剂盒、HBsAg检测试剂盒(ELISA法,由华美生物工程公司提供)。1.3细胞株2.2.15细胞引自广州空军医
5、院。1.4实验动物SD大鼠20只,体质量约为250g,雌雄各半。由广州中医药大学实验动物中心提供。1.5主要仪器二氧化碳孵箱(NAPCO5410);酶标仪(BIORAD:3550);TILD台式冷冻离心机。1.6实验方法1.6.1细胞培养将长满2.2.15细胞的培养瓶用0.6g/L的胰蛋白酶消化2~3min,弃消化液,加少量100g/LDMEM培养液轻轻吹打,将细胞配制成3×108/L单细胞悬液,接种于96孔细胞培养板中,其中留2孔作空白对照,其他每孔加细胞悬液0.1mL,空白孔每孔加100g/LD
6、MEM0.1mL,37℃、体积分数5%CO2培养48h,贴壁后用于实验。1.6.2药物血清的制备[4-6]20只SD大鼠随机分成4组,分别为中药低、中、高剂量组和正常血清组。正常血清组用2只大鼠,中药低、中、高剂量组各用6只大鼠,分别按30.2、60.4、120.8g·kg-1剂量灌胃(相当于50kg成人所用剂量的5、10、20倍),每日分2次灌胃,连续3d,末次给药后1、2、3h(每个剂量的每个时间段各用2只大鼠),于无菌条件下自腹主动脉采血;正常血清组大鼠灌以蒸馏水,并于最后同时采血;静置后,低温离
7、心(10000r/min,5min)分离血清,保存于-20℃备用。1.6.3含药血清对细胞的毒性试验和抑制试验将10种不同条件的20份血清(含正常血清2份)分别按1:0、1:1的比例与20g/LDMEM维持液混和,各取100μL/孔加入1个已滴有2.2.15细胞的96孔细胞板中,即血清终浓度为1:2和1:4,每种血清每个稀释度取2孔,并设细胞对照组(不加药)4孔及空白对照组2孔。细胞对照组及空白对照组每孔均加入20g/LDMEM100μL。加入血清后培养10d,吸取培养液放入另一个96孔板中,采用酶联免
8、疫吸附法(ELISA)进行HBsAg和HBeAg测定,用酶标仪以450nm波长测定D值,求出含药血清对抗原的抑制百分率[2]:p抑制/%=(D细胞对照组-D给药组)/(D细胞对照组-D空白对照组)×100%。药物对抗原的抑制百分率:p抑制/%=(D正常血清组-D含药血清组)/(D正常血清组-D空白对照组)×100%。原96孔板中每孔加0.4g/LMTT0.1mL,37℃、体积分数5%CO2孵育4h,弃上清后加二甲基亚砜0.1mL溶解,然后以
此文档下载收益归作者所有