caspase3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用

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1、caspase3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用：王占坤孙立江李旭东【摘要】　　目的观察caspase3抑制剂对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用，并探讨其作用机制。方法建立小鼠肾缺血再灌注模型，将实验动物随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组、治疗组(各10只)。治疗组小鼠给予AcDEVDCHO（4μg/g）0.3mL，缺血再灌注组再灌注时给予0.3mL含体积分数0.01DMSO的生理盐水，假手术组不夹闭肾蒂，余处理同缺血再灌注组。分别检测各组血肌酐(Cr)含量、尿素氮(BUN)含量、细胞凋亡指

2、数（AI）、caspase3活性、髓过氧化物酶(MPO)活性、黏附分子1（ICAM1）表达指数。结果治疗组与缺血再灌注组比较，血Cr和BUN均明显降低，caspase3活性受到明显抑制，AI明显下降，MPO活性显著降低，ICAM1表达明显减少，差异均有显著性（F=36.10～574.13,P<0.05）。结论AcDEVDCHO通过抑制细胞凋亡及炎症反应减轻肾脏缺血再灌注损伤。【关键词】肾再灌注损伤半胱氨酸内肽酶类细胞凋亡　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudyt

3、heprotectionanditsmechanismsofcaspase3inhibitoronrenalischemiareperfusioninjury.MethodsArenalischemiareperfusionmodeladein30rats,operationgroup(SOgroup),ischemiareperfusion(IRgroup),andAcDEVDCHOgroup(treatedgroup).AcDEVDCHOalsaline,0.3mL,to

4、IRgroupped.Themyeloperoxidase(MPO)andcaspase3activity,bloodureanitrogen(BUN)andcreatinine(Cr),renalcellapoptosisindex(AI),expressionofintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)ineachgroupsmatoryreaction.　　［KEYSO中，后用生理盐水稀释成0.3mL)，尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）检测试剂盒(南京

5、建成公司)，TUNEL试剂盒(Roche公司)，caspase3检测试剂盒（Promega公司），髓过氧化物酶（MPO）检测试剂盒(南京建成公司)，PoL/g腹腔注射麻醉小鼠后，沿腹正中纵轴线做0.8～1.0cm的切口，首先切除右肾，然后钝性分离左肾包膜，用无创动脉夹钳夹左肾蒂45min，造成肾缺血，然后松开血管夹，数分钟内肾脏颜色由缺血时的紫黑色转为红色，表示肾缺血再灌注模型建立成功。分二层关闭切口。为维持小鼠体液平衡，用1mL预热的(37℃)生理盐水皮下注射。在再灌注后12h处死小鼠，摘眼球

6、采血，切取左肾备用。　　1.3.2用药方法治疗组小鼠给予AcDEVDCHO，4μg/g；缺血再灌注组再灌注时予0.3mL含体积分数0.01DMSO的生理盐水；假手术组不夹闭肾蒂，余处理同缺血再灌注组。　　1.4检测指标及方法　　1.4.1血BUN和Cr含量的测定于再灌注12h后摘眼球取血约1mL，用酶法和苦味酸法分别检测BUN及Cr值。　　1.4.2细胞凋亡率测定制作肾脏石蜡切片，常规二甲苯脱蜡，采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡率，按检测试剂盒说

7、明书操作。光镜下观察，细胞核呈棕黄色者为凋亡细胞，于凋亡细胞分布区域，随机选取5个视野，400倍光镜下计数凋亡细胞，以肾小管上皮细胞凋亡阳性细胞数占总肾小管上皮细胞细胞数的百分比作为肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）。AI(%)=阳性细胞数/视野所有细胞总数×100%。　　1.4.3肾组织caspase3活性测定用预冷的组织裂解液(含有25mmol/LHepes、5mmol/LMgCl2、2mmol/LDTT、5mmol/LEDTA、体积分数0.001TritonX100)裂解新鲜肾组织。4℃13

8、000r/min离心20min，取上清，比色法测定caspase3活性，按试剂盒(CaspACETMAssaySystem，Colorimetric，Promega)说明书操作。酶标仪测405nm处吸光度（A）值，计算caspase3活性。　　1.4.4MPO测定在生理盐水冰盘上迅速取部分左肾组织，按质量体积比加入9倍的预冷生理盐水，制成10%组织匀浆，普通离心机（3500r/min）离心15min，取上清液置于-70℃冰箱。待标本收集齐后，按MPO试剂盒说明测定MPO活性。