caspase3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用论文

《caspase3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、caspase3抑制剂对肾缺血再灌注损伤的保护作用论文王占坤孙立江李旭东【摘要】目的观察caspase3抑制剂对缺血再灌注损伤肾脏的保护作用，并探讨其作用机制。方法建立小鼠肾缺血再灌注模型，将实验动物随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组、治疗组(各10只)。治疗组小鼠给予AcDEVDCHO（4μg/g）0.3mL，缺血再灌注组再灌注时给予0.3mL含体积分数0.01DMSO的生理盐水，假手术组不夹闭肾蒂，余处理同缺血再灌注组。分别检测各组血肌酐(Cr)含量、尿素氮(BUN)含量、细胞凋亡指数

2、（AI）、caspase3活性、髓过氧化物酶(MPO)活性、黏附分子1（ICAM1）表达指数。结果治疗组与缺血再灌注组比较，血Cr和BUN均明显降低，caspase3活性受到明显抑制.freelechanismsofcaspase3inhibitoronrenalischemiareperfusioninjury.MethodsArenalischemiareperfusionmodeladein30rats,operationgroup(SOgroup),ischemiare

3、perfusion(IRgroup),andAcDEVDCHOgroup(treatedgroup).AcDEVDCHOalsaline,0.3mL,toIRgroupped.Themyeloperoxidase(MPO)andcaspase3activity,bloodureanitrogen(BUN)andcreatinine(Cr),renalcellapoptosisindex(AI),expressionofintercellularadhesionmolecule1(I

4、CAM1)ineachgroupsmatoryreaction.［KEYSO中，后用生理盐水稀释成0.3mL)，尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）检测试剂盒(南京建成公司)，TUNEL试剂盒(Roche公司)，caspase3检测试剂盒（Promega公司），髓过氧化物酶（MPO）检测试剂盒(南京建成公司)，PoL/g腹腔注射麻醉小鼠后，沿腹正中纵轴线做0.8～1.0cm的切口，首先切除右肾，然后钝性分离左肾包膜，用无创动脉夹钳夹左肾蒂45min，造成肾缺血，然后松开血管夹，数分钟内肾脏颜色由缺血

5、时的紫黑色转为红色，表示肾缺血再灌注模型建立成功。分二层关闭切口。为维持小鼠体液平衡，用1mL预热的(37℃)生理盐水皮下注射。在再灌注后12h处死小鼠，摘眼球采血，切取左肾备用。1.3.2用药方法治疗组小鼠给予AcDEVDCHO，4μg/g；缺血再灌注组再灌注时予0.3mL含体积分数0.01DMSO的生理盐水；假手术组不夹闭肾蒂，余处理同缺血再灌注组。1.4检测指标及方法1.4.1血BUN和Cr含量的测定于再灌注12h后摘眼球取血约1mL，用酶法和苦味酸法分别检测BUN及Cr值。1.4.2细

6、胞凋亡率测定制作肾脏石蜡切片，常规二甲苯脱蜡，采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的原位末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡率，按检测试剂盒说明书操作。光镜下观察，细胞核呈棕黄色者为凋亡细胞，于凋亡细胞分布区域，随机选取5个视野，400倍光镜下计数凋亡细胞，以肾小管上皮细胞凋亡阳性细胞数占总肾小管上皮细胞细胞数的百分比作为肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）。AI(%)=阳性细胞数/视野所有细胞总数×100%。1.4.3肾组织caspase3活性测定用预冷的组织裂解液(含有25mmol/LHepes

7、、5mmol/LMgCl2、2mmol/LDTT、5mmol/LEDTA、体积分数0.001TritonX100)裂解新鲜肾组织。4℃13000r/min离心20min，取上清，比色法测定caspase3活性，按试剂盒(CaspACETMAssaySystem，Colorimetric，Promega)说明书操作。酶标仪测405nm处吸光度（A）值，计算caspase3活性。1.4.4MPO测定在生理盐水冰盘上迅速取部分左肾组织，按质量体积比加入9倍的预冷生理盐水，制成10%组织匀浆，普通离

8、心机（3500r/min）离心15min，取上清液置于-70℃冰箱。待标本收集齐后，按MPO试剂盒说明测定MPO活性。1.4.5肾组织中ICAM1检测应用免疫组化方法，操作按ICAM1试剂盒说明书进行。镜下观察，胞浆ICAM1阳性染色为棕黄色，采用医学图像分析软件(PIXERA，美国)进行分析。每例切片随机取10个肾小球视野，光学显微镜采集图像。输入图像分析系统内进行吸光度（A）测量，同时计算阳性着色面积，计算阳性指数，取平均值。阳性指数=阳性信号面积×阳性强度(平均灰度值)