cmv感染病儿实时荧光定量pcr检测及意义

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1、CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义：刘薇蒋玉红，孙佰秀，李海峰，罗兵【摘要】目的探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV）DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义。方法应用PE5700全自动PCR扩增分析仪，检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）尿液中的CMVDNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMVDNA含量，并测定治疗后的病毒载量。同时与血清CMVIgM抗体检测结果进行比较。对部分病儿进行临床观察和随访。结果病儿组C

2、MV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%。治疗后两组病儿尿液中CMVDNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较,差异有显著性（t=4.159、5.438，P<0.01）。实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMVIgM检测方法。9例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎经治疗后,1例CMVDNA转阴，3例仍阳性；4例无症状性感染病儿CMVDNA转阴或降至低水平。结论实时荧光定量PCR技术检测

3、CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点，量化结果便于对治疗过程进行连续监测，为病儿治疗和随访提供有效帮助。【关键词】巨细胞病毒感染；荧光免疫测定；聚合酶链反应巨细胞病毒(CMV)是已知病原微生物中最易引起小儿急、慢性感染的病毒之一，早期准确诊断CMV感染具有重要的意义[1]。CMV感染的临床表现多样,以往多通过检测血清特异性IgM以及定性PCR检测病毒DNA进行诊断，但易出现假阴性和假阳性结果。本文采用实时荧光定量PCR法检测可疑CMV感染病儿尿标本中CMVDNA含量,以评价其在CMV感染病儿诊断、治疗及动态监

4、测中的价值。　　1资料与方法　　1.1一般资料　　2005年5月～2006年5月，选择青岛市儿童医院收治临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）35例，男20例，女15例；年龄2d～1岁。根据CMV感染诊断方案[2]，当病儿出现与CMV感染相关的症状、体征时,诊断为症状性感染;当病儿无相关症状，无或有受损器官的体征和(或)实验室检查异常,诊断为无症状性感染。并选取同期45例同年龄段患非感染性疾病住院病儿作为对照组,其中男23例，女22例。　　1.2检测方法　　1.2.1尿CMVDNA测定采用实时荧光定量PCR方法。清洁

5、小儿外阴,留取新鲜尿液2mL送检。试剂由深圳匹基生物有限公司提供,仪器为美国PE公司PE5700基因扩增仪，扩增结束后拷贝数小于106/L为阴性，拷贝数大于106/L为阳性，并由仪器根据标准曲线自动计算出定量结果。　　1.2.2血清CMVIgM抗体检测采集小儿非抗凝静脉血2mL，分离血清置4℃保存，采用美国HOPE公司生产ELISA试剂盒检测血清CMVIgM抗体。　　1.3治疗方法　　症状性感染组病儿一经确诊有CMV感染，立即给予更昔洛韦10mg／（kg·d）加入50g/L葡萄糖注射液100～200mL中静脉滴注，

6、连用10d为1个疗程，同时辅以保肝药物如维生素C、肝复肽等治疗。根据病情和肝功能、CMV病毒载量的复查结果决定治疗疗程。无症状性感染组病儿用更昔洛韦抗病毒治疗1个疗程。　　1.4随访　　症状性感染组和无症状性感染组病儿分别于治疗后半年、1年和2年监测肝功能和CMV病毒载量，并应用无创性超声观察小儿的肝脏形态学、血流动力学相关指标改变及肝脏是否有纤维化。　　1.5统计学方法　　用SPSS11.5统计软件进行数据处理，CMVDNA拷贝数以指数表示（log10）x。计量资料组间比较采用t检验，计数资料比较用χ2检验。　　2

7、结果　　2.1实时荧光定量PCR法检测　　病儿组CMV阳性者（症状性感染）27例,占77.14%；对照组CMV阳性者（无症状性感染）12例,占26.67%。与治疗前比较，两组治疗后CMVDNA拷贝数指数下降幅度均较大,差异有显著性（t=4.159、5.438，P<0.01）。治疗前、治疗后两组间CMVDNA拷贝数指数比较，差异均有显著性（t=2.454、2.432，P<0.05）。见表1。　　2.2两种方法的检测结果比较　　实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率为48.75%(39/80),血清CMVI

8、gM检测方法CMV阳性检出率为13.75%(11/80)，前者阳性检出率高于后者。　　2.3随访结果　　9例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎病儿治疗后,1例CMVDNA转阴，3例CMVDNA仍阳性，其中1例预后不良，3例预后良好；4例无症状性感染病儿CMVDN