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1、HMGB1对肝星状细胞细胞外基质合成的影响：韩红莉杨柳絮吴红样赵中夫【摘要】目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对肝星状细胞(hepaticstellatecellHSC)合成细胞外基质(extracellularmatrixECM)的影响。方法：剂量效应组分别用含HMGB10mg/L,0.1mg/L,1.0mg/L,10mg/L，20mg/L和40mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T66h；时间效应组以含有10mg/LHMGB1的培养液培养0h、6h、12h、18h和24h,对照组以不含HMGB1的培养液分别培养HSC-T6细胞，留取各组培养液离心后的上清，用双抗
2、体夹心ELISA方法检测其上清中PⅢP和CⅣ的含量。结果：对照组HSC-T6细胞ECM分泌量较低；HSC-T6的ECM分泌量与HMGB1呈剂量依赖关系(r=0.835,0.955，P<0.05)；10mg/LHMGB1时间效应组的PⅢP,CⅣ分泌量在18h和24h均明显高于对照组（P<0.05）。结论：HMGB1能诱导HSC-T6细胞分泌ECM，可能在肝纤维化的发生、发展中发挥重要作用。【关键词】HMGB1；HSC-T6；细胞外基质；肝纤维化AbstractObjective:ToinvestigatetheeffectofHumanhighmobilitygro
3、upbox1protein(HMGB1)ontheextracellularmatrixsecretionofrathepaticstellatecellandexplorethefunctionofHMGB1intheoccurrenceanddevelopmentofhepaticfibrosis.Methods:TheeffectsofvariousdosesofHMGB1ontheECMsecretionoftheHSC-T6cells:Cellsg/L,0.1mg/L,1.0mg/L,10mg/L,20mg/L,40mg/L),eachgroupcellsulate
4、dbydifferentconcentrationsofHMGB1for6h;TherelationshipstimulatedtimeofHMGB1andsecretionofECMinHSC-T6cells:cellsulatedgroups(0h,6h,12h,18h,24h,HMGB110mg/L).ThePⅢPandCⅣofculturesupernatantethod.Results:ThesecretionofECMinthecontrolgroupsulatedgroups.Anditeulatedgroupsg/L-10mg/Lscope(r=0.835,0
5、.955，P<0.05).Conclusion:ThesecretionofECMinHSC-T6cellportantroleinthedevelopmentofhepaticfibrosis.KeyL,细胞贴壁后改用2%的胎牛血清的DMEM培养液同步饥饿培养2h,使培养细胞处于G0期后做下面实验：1.2.1.HMGB1的剂量效应组：分别用含有0mg/L、0.1mg/L、1.0mg/L、10mg/L、20mg/L和40mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T6，6h后,收集HMGB1刺激孔及对照孔培养上清液，用双抗体夹心ELISA法测HSC-T6培养上清液中PⅢP，C
6、Ⅳ的含量。以上每组均设3个复孔，具体操作严格按照试剂盒说明进行。1.2.2.HMGB1的时间效应组：刺激组（10mg/LHMGB1）和正常对照组（等量的PBS）分别用含10mg/LHMGB1和等量的PBS的DMEM培养液培养HSC-T6细胞0h、6h、12h、18h和24h,同上收集培养上清液用双抗体夹心ELISA方法测HSC-T6培养上清液中PⅢP，CⅣ的含量。以上每组均设3个复孔，具体操作严格按照试剂盒说明进行。1.3统计学方法 采用SPSS12.0统计软件，进行Spearman相关分析，单因素ANOVA(方差分析)，两样本比较采用LSD-t检验，实验数据均以(x±s)表
7、示,P＜0.05判定有显著性差异。 2.2.HMGB1对HSC-T6分泌PⅢP,CⅣ的时间效应刺激组HSC-T6分泌PⅢP、CⅣ在0h～24h间呈递增趋势,随着时间的延长增加,呈时间依赖关系(r=0.970，0.982，P<0.05)，正常对照组上清液PⅢP、CⅣ含量变化趋势与HMGB1刺激组一致。在6h和12h两组上清液PⅢP、CⅣ的含量无显著差异（P>0.05），但在18h、24h刺激组上清液PⅢP,CⅣ含量明显高于正常对照组（P<0.05）(见图1,图2)。3讨论 目前认为HS
