il23受体在炎症性肠病患者外周血淋巴细胞中的表达及意义

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1、IL23受体在炎症性肠病患者外周血淋巴细胞中的表达及意义【关键词】IL23受体；炎症性肠病；T淋巴细胞；NK细胞；溃疡性结肠炎；克罗恩病ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofIL23receptorinTlymphocytesandNKcellsinperipheralbloodmononuclears(PBMC)frompatientsmatorybo30patientsinetheexpressionofIL23receptorinTlymphocytesandNKcellsbyfloetry.Thesurfaceoflym

2、phocytesinedbythreecolourfloetryininflammatoryboalperipheralblood.ResultsTheexpressionofIL23RonperipheralCD4+T,CD8+TandCD56+NKcellsofpatientsphocytesandNKcellsofpatientsportantroleinthepathogenesisofIBD.KEYmatorybophocyte;NKcell;ulcerativecolitis;Crohnsdisease炎症性肠病(inflammatoryboL放入抗凝管中，取离

3、心管一支，加入等体积的淋巴细胞分离液，用移液管把混匀的静脉血小心地加入到淋巴细胞分离液上。将样本放入低温离心机中，于2500r/min转离心30min，提取中间层的淋巴细胞，加生理盐水洗涤2次，得到淋巴细胞。1.4外周血淋巴细胞IL23R表达的检测提取好的淋巴细胞100μL加入生物素标记的羊抗人IL23R抗体20μL，避光孵育30min后清洗2次；加入FITC荧光标记的抗生物素的二抗3μL，避光孵育30min后清洗2次；分别加入PE荧光标记的鼠抗人CD4单克隆抗体、PerCP荧光标记的鼠抗人CD8单克隆抗体及PE荧光标记的鼠抗人CD56单克隆抗体各2.5μL，同时设立同型阴

4、性对照；常温下避光孵育20min；加入0.5mL磷酸盐缓冲液(PBS)，FACSCan流式细胞仪检测，BDFACS专用Cellquest3.0软件分析。1.5统计学处理全部数据用流式细胞仪(FACSCan，美国BD公司)和Cellquest3.0软件进行三色荧光参数的获取和分析。计量资料以±s表示，组间数据比较采用方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1外周血CD4+T细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD4+T细胞的频率分别为(0.34±0.20)%(图A)、(4.62±1.10)%、(4.14±0.83)

5、%，与健康对照组相比，CD和UC患者CD4+T细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。2.2外周血CD8+T细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD8+T细胞的频率分别为(1.12±0.22)%、(6.42±1.74)%(图B)、(4.79±2.06)%，与健康对照组相比，CD和UC患者CD8+T细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。2.3外周血CD56+NK细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD8+NK细胞的频率分别为(1.34±0.46)%、(5

6、.73±1.50)%、(5.16±1.47)%(图C)，与健康对照组相比，CD和UC患者CD56+NK细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。3讨论IL23是属于IL12家族的成员，主要由激活的单核巨噬细胞及树突状细胞产生，而后者是肠黏膜固有层的主要组成部分。近来发现IL23也可由大脑中的小胶质细胞分泌产生[4]。现已证实IL23在自身免疫性疾病中发挥了重要的作用，如在实验性过敏性脑脊髓炎、类风湿关节炎的模型胶原诱导性关节炎及人类银屑病中起到关键的促炎症作用[5]。本研究发现，在UC和CD患者中，IL23R在外周血CD4+T细胞和NK细胞表面的表达

7、无显著差异，均高于健康对照组。本实验首次证实IL23R在IBD患者外周血T细胞及NK细胞中的表达显著升高。在CD患者中，IL23R在外周血CD8+T细胞表面的表达频率为(6.42±1.74)%，稍高于在UC患者中的(4.79±2.06)%，这可能与以往报道的在UC患者的活动期CD8+T细胞下降而在CD患者CD8+T细胞升高有关。研究中还发现，肠黏膜病变严重、出血及发热明显的患者IL23R的表达频率更高，健康对照组中IL23R只有微弱的表达，表明IL23R的确参与了IBD