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时间:2018-05-01
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1、IL23受体在炎症性肠病患者外周血淋巴细胞中的表达及意义【关键词】IL23受体;炎症性肠病;T淋巴细胞;NK细胞;溃疡性结肠炎;克罗恩病ABSTRACT:ObjectiveTodetecttheexpressionofIL23receptorinTlymphocytesandNKcellsinperipheralbloodmononuclears(PBMC)frompatientsmatorybo30patientsinetheexpressionofIL23receptorinTlymphocytesandNKcellsbyfloetry.Thesurfaceoflym
2、phocytesinedbythreecolourfloetryininflammatoryboalperipheralblood.ResultsTheexpressionofIL23RonperipheralCD4+T,CD8+TandCD56+NKcellsofpatientsphocytesandNKcellsofpatientsportantroleinthepathogenesisofIBD.KEYmatorybophocyte;NKcell;ulcerativecolitis;Crohnsdisease炎症性肠病(inflammatoryboL放入抗凝管中,取离
3、心管一支,加入等体积的淋巴细胞分离液,用移液管把混匀的静脉血小心地加入到淋巴细胞分离液上。将样本放入低温离心机中,于2500r/min转离心30min,提取中间层的淋巴细胞,加生理盐水洗涤2次,得到淋巴细胞。1.4外周血淋巴细胞IL23R表达的检测提取好的淋巴细胞100μL加入生物素标记的羊抗人IL23R抗体20μL,避光孵育30min后清洗2次;加入FITC荧光标记的抗生物素的二抗3μL,避光孵育30min后清洗2次;分别加入PE荧光标记的鼠抗人CD4单克隆抗体、PerCP荧光标记的鼠抗人CD8单克隆抗体及PE荧光标记的鼠抗人CD56单克隆抗体各2.5μL,同时设立同型阴
4、性对照;常温下避光孵育20min;加入0.5mL磷酸盐缓冲液(PBS),FACSCan流式细胞仪检测,BDFACS专用Cellquest3.0软件分析。1.5统计学处理全部数据用流式细胞仪(FACSCan,美国BD公司)和Cellquest3.0软件进行三色荧光参数的获取和分析。计量资料以±s表示,组间数据比较采用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1外周血CD4+T细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD4+T细胞的频率分别为(0.34±0.20)%(图A)、(4.62±1.10)%、(4.14±0.83)
5、%,与健康对照组相比,CD和UC患者CD4+T细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。2.2外周血CD8+T细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD8+T细胞的频率分别为(1.12±0.22)%、(6.42±1.74)%(图B)、(4.79±2.06)%,与健康对照组相比,CD和UC患者CD8+T细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。2.3外周血CD56+NK细胞表面IL23R的表达情况健康对照组、CD患者组及UC患者组的IL23R+CD8+NK细胞的频率分别为(1.34±0.46)%、(5
6、.73±1.50)%、(5.16±1.47)%(图C),与健康对照组相比,CD和UC患者CD56+NK细胞表面IL23R的表达均明显增高(P<0.05)。3讨论IL23是属于IL12家族的成员,主要由激活的单核巨噬细胞及树突状细胞产生,而后者是肠黏膜固有层的主要组成部分。近来发现IL23也可由大脑中的小胶质细胞分泌产生[4]。现已证实IL23在自身免疫性疾病中发挥了重要的作用,如在实验性过敏性脑脊髓炎、类风湿关节炎的模型胶原诱导性关节炎及人类银屑病中起到关键的促炎症作用[5]。本研究发现,在UC和CD患者中,IL23R在外周血CD4+T细胞和NK细胞表面的表达
7、无显著差异,均高于健康对照组。本实验首次证实IL23R在IBD患者外周血T细胞及NK细胞中的表达显著升高。在CD患者中,IL23R在外周血CD8+T细胞表面的表达频率为(6.42±1.74)%,稍高于在UC患者中的(4.79±2.06)%,这可能与以往报道的在UC患者的活动期CD8+T细胞下降而在CD患者CD8+T细胞升高有关。研究中还发现,肠黏膜病变严重、出血及发热明显的患者IL23R的表达频率更高,健康对照组中IL23R只有微弱的表达,表明IL23R的确参与了IBD
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