il12+重组卡介苗对新生期小鼠脾脏t细胞功能亚群发育的影响

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1、IL12+重组卡介苗对新生期小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响：何云,刘恩梅*,杨锡强,李欣,刘玮【摘要】　　目的:研究IL12+重组BCG新生期接种对小鼠脾脏T细胞功能亚群发育的影响。方法:新生清洁级BALB/c小鼠24只,分对照组、BCG组和IL12+重组BCG组。新生期接种,4周后取脾细胞用流式细胞术检测CD3+CD8+IFNγ+、CD3+CD8-IFNγ+、CD3+CD8+IL４+、CD3+CD8-IL４+、CD4+Foxp3+T细胞的比例,其分别代表Tc1、Th1、Tc2、Th2和调节性T细胞亚群。结果:BCG组、IL12+重组BCG

2、组Th1、Tc1细胞比例明显高于对照组（P<0.05或P<0.01）,BCG组与IL12+重组BCG组比较没有统计学意义;Tc2、Th2和调节性T细胞比例各组间比较没有统计学意义;二接种组Th1/Th2、Tc1/Tc2和总IFNγ/IL4比值明显高于对照组（P<0.05或P<0.01）;CD4+Foxp3+T细胞比例各组间比较没有统计学意义(P>0.05)。结论:新生期BCG和IL12+重组BCG接种组接种均能促进Th1、Tc1细胞亚群的发育,提高Th1/Th2、Tc1/Tc2比值,但不能影响CD4+FoxP3+Treg

3、细胞的比例。【关键词】卡介苗白细胞介素12T细胞亚群调节性T细胞　　［Abstract］AIM:ToexploretheeffectsofrebinantBalillusCalmetteGuerinsecretingIL12onthedevelopmentofspleenTcellsubsetsofneonatalBALB/cmice.METHODS:Ticesiceetryatsinglecellslevel,andTh1/Th2,Tc1/Tc2ratioice,rBCGvaccinatedmiceice(P<0.01),andthereon

4、gthethreegroups(P>0.05).CONCLUSION:NeonatalBCGandrBCGvaccinationcansignificantlyincreaseTc1andTh1cellsandTh1/Th2,Tc1/Tc2ratioinspleencells.NeonatalBCGandrBCGvaccinationmayhaveansameeffectsondevelopmentofTcellsubsetsinneonatalBALB/cmice.ThepercentageofCD4+Foxp3+Tcellsamongthre

5、egroupsetteguerin;interleukin12;Tcellssubsets;regulatoryTcell　　卡介苗（bacilluscalmetteguerin,BCG）可通过诱导Th1/Tr免疫应答而保护哮喘,我们前期研究发现呼吸道合胞病毒（respiratorysyncytialvirus,RSV）能逆转新生期BCG接种的抗哮喘作用,其机制尚不清楚［1,2］。IL12是Th1分化发育的关键细胞因子。皮下注射重组IL12能减少哮喘患者嗜酸性粒细胞水平,但降低气道高反应性的作用不明显,也不能改善随后的哮喘症状,并有严重的副作用［3

6、］。我们将IL12与BCG重组后能避免直接使用重组IL12的副作用,又能增强BCG的Th1/Tr应答,并分别以CD3+CD8+IFNγ+、CD3+CD8-IFNγ+、CD3+CD8+IL4+、CD3+CD8-IL４+、CD4+Foxp3+T细胞代表Tc1、Th1、Tc2、Th2及T调节性细胞水平,在单细胞水平观察IL12+重组BCG在新生期接种对小鼠脾脏细胞亚群发育的影响。　　1材料和方法　　1．1材料清洁级BALB/c小鼠购自重庆医科大学实验动物中心,饲养于专用消毒饲养盒内,恒定室温。过滤空气,饲料、水皆经消毒处理,更换饲料等操作在超净台内进

7、行。新生2～3d小鼠共24只,分为对照组、BCG组和IL12+重组BCG接种组,每组8只。BCG组给以BCG(上海生物制品研究所,批号2005030211,购于重庆市渝中区疾控中心)1×105CFU/只腹腔、皮下联合注射;IL12+重组BCG以rBCG1×105CFU/只腹腔、皮下联合注射;生后满4周无菌取脾脏进行流式细胞仪检测。　　1.2方法　　1．2．1IL12+重组BCG的构建及鉴定先构建表达IL12的穿梭质粒,并将其转化入BCG(本部分实验由重庆医科大学微生物教研室完成)。　　1．2．2胞内细胞因子（IFNγ、IL４）的流式检测无菌取

8、脾,在300目不锈钢网上少量PBS冲洗下轻轻研磨制成