探讨氯霉素氢化可的松滴耳液含量测定方法的改进

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1、探讨氯霉素氢化可的松滴耳液含量测定方法的改进氯霉素氢化可的松滴耳液收载于《中国医院制剂规范》(第2版)，根据其标准检验，原标准中氯霉素的含量测定方法采用UV法，该方法专属性不高，不能对降解产生氯霉素二醇物与氯霉素进行有效分离，易造成含量测定结果偏高。本文拟将氯霉素与氢化可的松的含量测定方法修改为HPLC法，同时测定两个有效成分。现报道如下。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　1200高效液相色谱仪，包括G1329A-自动进样器、G1315B-DAD检测器、G1311A-四元泵和G1316A-柱温箱(美国安捷伦科技有限公司);MSA225S电子天平和B

2、P110S电子天平(德国赛多利斯公司)。　　1.2试药　　氯霉素氢化可的松滴耳液(规格:以氯霉素计100ml2.25～2.75g，以氢化可的松计100ml0.45～0.55g;解放军第159中心医院，批号:20130705;解放军第175医院，批号:130401);氯霉素对照品(批号:130555-201203，含量:99.8%)、对硝基苯甲醛对照品(批号:130562-200902，含量:96.1%)、氯霉素二醇物对照品(批号:130436-200704，含量:99.5%)和氢化可的松对照品(批号:100152-200206，含量:100%)

3、均购自中国食品药品检定研究院;甲醇、庚烷磺酸钠为色谱纯，磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺为分析纯，水为超纯水。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱:资生堂SPOLARC18柱(250mm$4.6mm，5!m);流动相:0.01molL-1庚烷磺酸钠缓冲溶液(称取磷酸二氢钾6.8g，用0.01molL-1庚烷磺酸钠缓冲溶液溶解并稀释至1000ml，再加三乙胺5ml，混匀，用磷酸调pH至2.5)-甲醇(40∶60);柱温:30℃;流速:1.0mlmin-1;检测波长:245nm;进样量:10μl。理论板数按氯霉素计算不低于2000。　　2.2溶液

4、的制备　　2.2.1供试品溶液精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。　　2.2.2混合对照品溶液取氯霉素与氢化可的松对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氯霉素0.25mg与氢化可的松0.05mg的混合对照品溶液。　　2.2.3阴性样品溶液按氯霉素氢化可的松滴耳液的空白处方配制阴性样品，并按2.2.1项下方法配制阴性样品溶液。　　2.2.4系统适用性溶液取氯霉素、氯霉素二醇物和对硝基苯甲醛对照品适量，加流动相稀释制成浓度均为0.05mgml-1的系统适用性溶液。　　2.3系统适用性试验　　

5、取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液和系统适用性溶液按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。氯霉素、氯霉素二醇物、对硝基苯甲醛和氢化可的松之间完全分离，空白辅料不干扰样品的测定;在此液相色谱条件下色谱柱的理论塔板数按氯霉素的峰可达到10000以上。　　2.4线性关系考察　　分别取氯霉素对照品62.82mg和氢化可的松对照品13.66mg，精密称定，置同一25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，分别精密量取0.2，0.5，1.0，2.0，3.0ml用流动相稀释至10ml，得系列浓度的标准溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以浓度(C，μg

6、ml-1)对峰面积(A)作线性回归，得氯霉素回归方程为:A=5.2694C+37.3919(r=0.9996)，氢化可的松的回归方程为:A=24.5039C+26.0130(r=1.0000)。结果表明:氯霉素在50.26～753.84μgml-1、氢化可的松在10.93～163.92μgml-1范围内与峰面积有良好的线性关系。　　2.5精密度试验　　精密称取氯霉素和氢化可的松对照品置于同一量瓶中，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含氯霉素0.25mg与氢化可的松0.05mg的溶液，按2.1项下色谱条件连续进样6次，计算得氯霉素峰面积的

7、RSD为0.08%(n=6)，氢化可的松峰面积的RSD为0.10%(n=6)，表明仪器精密度良好。　　2.6重复性试验　　精密量取本品1ml(批号:2013070)，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，同法配制6份，按2.1项下色谱条件进样测定。测得氯霉素的平均含量为2.38%(gml-1)，RSD为0.16%(n=6)，氢化可的松的平均含量为0.50%(gml-1)，RSD为0.24%(n=6)，表明该方法重复性良好。　　2.7稳定性试验　　取供试品溶液(批号:2013070)分别于室温条件下放置0，2，4，8，12h时进样测定，计算得氯霉素

8、峰面积的RSD为0.15%(n=5)，氢化可的松峰面积的RSD为0.12%(n=5)，结果表明供试品溶液在12h范围内稳定