免疫组化学技术在病理组织中的运用情况分析

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1、免疫组化学技术在病理组织中的运用情况分析　　免疫组织化学染色技术是抗原和抗体相结合的免疫反应，通过免疫组织化学反应，使得存在于细胞中的特异性抗体显示出来，有利于在显微镜下观察诊断。为了研究免疫组化学技术在病理组织中的应用情况，选择60例肿瘤患者进行了相关研究。　　1资料与方法　　1.1临床资料选择2011年1月～2013年1月住院患者60例进行研究，男性患者35例，女性患者25例，患者年龄在25～60岁，平均为(41.2±3.7)岁，其中有肝细胞肝癌12例，转移性肿瘤38例，肝内胆管癌7例，血管瘤3例，平均病程为9个月。全部患者

2、诊断临床均符合SP试剂;⑦中性树胶。以上试剂全部由福州迈新生物技术开发有限公司提供。　　1.2.2免疫组化方法①固定切片:每例病例取一块组织，大小为1cm2cm0.2cm，采用10%中性缓冲甲醛固定液将其固定2h，用脱水液脱水1h，透明液透明1h，浸蜡液1h，之后进行石蜡包埋，采用常规切片方法切片，厚度为2μm;②免疫组化染色:将固定好的切片脱蜡后用3%的双氧水在室温下孵育10min，后用蒸馏水洗涤3min，共进行3次，之后用高压锅修复2min，高压锅温度为110℃，PBS洗涤5min，共进行3次，加入滴一抗，室温37℃下孵育2h，PB

3、S洗涤同上，加入UltrasenSitiveTM试剂，37℃孵育20min，PBS洗同上，之后进行DAB显色，蒸馏水冲洗，苏木精复染核60min，行梯度乙醇脱水、二甲苯透明后，用中性树胶封固。　　1.3阳性诊断标准免疫组化染色呈棕黄色为阳性。　　2结果　　经免疫组化染色后30例患者当中的大部分患者的细胞结构都呈变异型性，28例患者的AFP(α－Fetoprotein)、Glypican－3均呈阳性，阳性率为93.3%，与手术检查结果一致，而穿刺活检中，AFP(α－Fetoprotein)、Glypican－3阳性20例

4、，阳性率为50.0%，差异显着(P＜0.05)。12例肝细胞肝癌患者经免疫组化诊断6例，确定3例患者已无法进行手术治疗，之后对这3例患者随访，发现2例患者已死亡，死亡率为66.7%;7例肝内胆管瘤患者行免疫组化4例，其CK7、CK20、CK1呈阳性，阳性率100%，后期3例患者死亡，死亡率为75.0%;38例肝脏转移性肿瘤患者行免疫组化19例，均找到了原发灶，阳性率100%，后期死亡，14例;3例血管瘤患者经免疫组化2例，实施血管瘤手术，后期随访并无复发现象，死亡1例，治疗成功率为50.0%。　　3讨论　　免疫组织化学技术是病理诊断中的常见方

5、法，尤其在各种肿瘤的诊断中具有较高的诊断准确率。研究中，共60例肿瘤患者，30例患者经免疫组化技术后，28例患者的AFP(α－Fetoprotein)、Glypican－3均呈阳性，阳性率为93.3%，这与临床其他研究结果相似。在不同类型的肿瘤疾病中，也能获得相对准确的判断，本次研究中免疫组化技术在肝内胆管瘤、肝脏转移性肿瘤、血管瘤中均获得了较高的阳性率。　　免疫组织化学染色是近些年来逐渐发展起来的病理技术之一，但它本身的操作很容易受到环境因素的影响，比如说固定剂、切片、抗原修复、温度、时间和人为因素的影响，导致在病理诊断中出现不

6、应有的误诊现象。因此，在操作的过程中，严格的按照标准去操作:①组织固定:目前在组织固定过程中选择较多的10%中性缓冲甲醛固定液，相对于甲醛固定液，其固定较好，时间保持较久，能在60d保持稳定的阳性率。②烤片:推荐的温度是在60～68℃的恒温箱中加热，但是需要注意的是温度不能过高;③抗原修复:时间最好是在5～8min，喷汽之后的时间在2min左右时，再把锅端开，让切片自然地冷却下来，进行下一步骤的染色;④染色:在免疫组织化学染色时需要进行苏木素的复染，苏木素复染不应过深，如果过深，有可能会覆盖住染色过浅的阳性细胞，影响正确的诊断。　　免疫组化显

7、色是一种酶促的反应，它主要是经过和抗原抗体复合物的碱性磷酸酶和过氧化物酶与底物的反应，从而生成了有颜色的复合物，沉淀在组织和细胞中的抗原的位置。因为组织标本的的不同，抗原的含量不等，细胞的分化不一，所出现的显色反应的时间也相应不同，在染色的过程中需要对如下方面加强注意:①在整个染色中，切片要始终保持湿润;②在孵育过程中要合理确定孵育盒中的蒸馏水量;③在加抗体中，选择单克隆抗体;④在孵育盒中孵育时，孵育盒要放平，包成抗体液体在组织上的均匀性，避免抗体液体流到组织一边，出现假阴性结果。