观察parkin对阿尔茨海默病转基因果蝇模型的保护作用

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1、观察parkin对阿尔茨海默病转基因果蝇模型的保护作用　　阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是一种最常见的老年痴呆类型，其特征性病理学改变主要为Tau蛋白、β淀粉样蛋白的沉积等。该疾病的临床表现主要为进行性认知功能障碍，可伴有震颤麻痹和肌萎缩等帕金森相关症状。有研究报道，Tau蛋白相关疾病的患者伴有帕金森疾病相关蛋白parkin的突变。parkin蛋白由PARK2基因编码，具有E3泛素－蛋白连接酶活性，泛素－蛋白酶体系统通过处理丧失正常功能的蛋白质从而作为细胞质量的控制系统。该研究探讨parkin对AD的作用，

2、采用遗传干预使dparkin在ninaE-GAL4/UAS系统的AD转基因果蝇模型视X膜光感受神经元中表达，观察parkin对AD转基因果蝇模型是否具有保护作用，并进一步验证这种保护作用是否与线粒体分裂基因Drp1有关。　　1材料与方法　　1．1材料果蝇品系:UAS-dparkin、ington果蝇中心;模型UAS-hTauR4063/TM6由中南大学医学遗传学国家重点实验室惠赠。　　1．2方法　　1．2．1果蝇杂交　　1．2．1．1构建u;lHCLO4，研磨完成后在离心机用3500r/min离心15min，取上清液，缓慢加入0.2mol/LKOH，调

3、节样品pH至7．5，运用离心机3500r/min，离心15min，取上清液至新的EP管中，样品制备成功;将样品在高效液相色谱仪上进行果蝇样品ATP值检测。该试验重复至少3次。　　1．3统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行分析，数据以珋x±s表示，采用配对t检验分析。　　2结果　　2．1dparkin对AD转基因果蝇模型的影响正常对照组果蝇复眼结构完整，纹路清晰。AD转基因果蝇模型复眼外形不规则，纹路消失，面积较前者明显减小，见图1。dparkin对疾病模型干预后，果蝇复眼较模型呈现明显的好转，复眼面积明显增大，纹路较清晰，见图2。A

4、D转基因果蝇模型与正常对照组比较，其ATP浓度明显降低，见图3。dparkin干预疾病模型后，其ATP水平较前者明显升高。见图4。　　2．2Drp1RNAi干预后，dparkin对AD转基因果蝇模型的影响Drp1RNAi干预后，dparkin对AD转基因果蝇模型的神经变性抑制作用减弱，出现。　　3讨论　　AD是一种常见的神经系统变性疾病，据统计，在全部痴患者中，AD占一半及以上，已严重影响了患者的身心健康和生活质量。由于该病的病因及发病机制尚未完全阐明，所以临床上亦无特效治疗药物。目前国内外对AD研究热点主要集中在:β-淀粉样蛋白、Tau蛋白

5、。Tau蛋白是微管相关蛋白(microtubuleassociatedproteins，MAPs)的组分之一，MAPs与微管蛋白组成微管，后者是神经元骨架蛋白的重要成分，参与胞体和轴突营养的输送。而AD患者脑中的Tau蛋白则异常过度磷酸化，并使其丧失正常生理功能。　　人类的Tau蛋白有很多突变位点，其中突变频率最高的为R4063后，与疾病模型组比较，ninaE-GAL4/UAS-dpar-kin;UAS-hTauR406W/+果蝇复眼结构比较完整，复眼面积有所增大，纹路较清晰，且ATP值增高。　　另外，parkin的作用多样，如在各种应激中par-ki

6、n阻止了细胞的凋亡;parkin被认为通过自噬调控着线粒体的功能;parkin可以介导线粒体的分裂等。且过度磷酸化的Tau蛋白可以通过线粒体分裂蛋白Drp1在体内的错误定位而促进神经元的变性，线粒体的功能异常被认为与AD等相关的神经变性型疾病有关。有研究表明，Tau蛋白的过度磷酸化可以导致果蝇和老鼠体内线粒体的延长，进而导致线粒体功能紊乱，以及细胞的死亡。本研究显示将Drp1敲除后，dparkin对AD转基因果蝇模型的保护作用明显减弱。可见，上述研究parkin对AD转基因果蝇模型具有的神经保护作用可能与线粒体分裂蛋白Drp1有关。而这种保护的确切机制

7、还需进一步研究。