糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备

ID:9375772

大小:2.21 MB

页数:69页

时间:2018-04-29

糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备_第1页
糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备_第2页
糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备_第3页
糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备_第4页
糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备_第5页
资源描述:

《糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、分类号UDCR446.1616密级坌珏编号1哩四S哩增Q!璺@江薄大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目糖化血红蛋白Alc的HPLC测定方法建立与多学科专业作者姓名指导教师答辩日期2011年06月1O日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致,允许论文被查阅和借阅,同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询,

2、授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。

3、本学位论文属于不保密刨。指导教师签名:旷F嘶k汕“年6月/L日人爪Ⅵl刘r卦,狲名,别侣辎Ⅳ作月文厶。,、.'、砑一-一蛐年学沙4独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果,也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均

4、已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。参日翁v匆寻L∥月孙毛签E懿年,叩●)刘沙论:位期学日6分类号B垒垒鱼:!UDC616多扁号lQ2窆窆SQ墨!垒Q!窆硕士学位论文糖化血红蛋白A10的HPLC测定方法建立与多克隆抗体的制备EstablishmentofHighPressureLiquidChromatographyMethodandPreparationofPolyclonalAntibodyforGlycosytedHemoglobinAlc作者姓名:涂国华指导教师:陈盛霞教授姜旭淦副教授申请学位:硕士学科专业:临床检验诊断学

5、论文提交日期:2011年04月26日论文答辩日期:2011年06月10日学位授予单位:江苏大学学位授予日期:2011年06月答辩委员会主席:许化溪评阅人:8江苏大学硕士学位论文摘要目的:建立糖化血红蛋白Ale的HPLC测定方法。从正常人红细胞中分离和纯化Alc,并制备糖化血红蛋白Alc的多克隆抗体。方法:以Bio.Rex70[jH离子交换树脂为填料,在HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定HbAlc,对50例健康人和50例糖尿病患者HbAlc进行测定。采集健康人全血,分离红细胞并制备溶血液,采用离子交换层析法和硼酸琼脂糖亲和层析法,分离和纯化HbAlc和HbA0。合

6、成Hb的p链氨基末端六肽,经加入葡萄糖基团后,偶联到BSA上,制备免疫抗原。将该抗原(1.2mg/m1)与等体积福氏完全佐剂乳化后,每只小鼠0.12mg抗原皮下多点免疫Balb/cd、鼠,于第3周、第5周和第7周加强免疫并采集尾静脉血测定效价,第8周摘取小鼠眼球收集血液,以酶联免疫吸附实验检Nd,鼠血清HbAlc抗体效价。结果:Hb、HbAlc和HbA0的吸收光谱一致,吸收峰均为415nm,HPLC.离子交换层析方法能使HbAlc与HbAl(a+b)、HbA0清楚分离,HbAlc峰面积或峰高与标本中HbAlc含量成正比。50例健康人HbAlc检测结果为3.3%

7、~6.1%,50例糖尿病患者HbAlc检测结果为6.8%~14.4%。健康人红细胞溶血液,采用离子交换层析手工装柱分离提取HbAlc和HbAO峰值部分,HPLC法测定纯度分别为79.78%和97.42%,再经亲和层析纯化,HbAlc纯度可达94.5%,HbAO纯度可达99.7%。纯化抗原HbAlc可作为ELISA包被抗原来检测抗体效价,纯化抗原HbA0可作为ELISA包被抗原来检测交叉反应。合成抗原与福氏佐剂乳化后免疫Balb/Cd',鼠4次后,抗体效价达1:10000"---"1:100000。结论:Bio.Rex70.HPLC法测定糖化血红蛋白具有精密度好

8、、准确度高、线性范围宽等优点,可用于GHb或HbAlc常规方法的评价和临床标本糖化血红蛋白Alc的HPLC测定方法建立与多克隆抗体制备的分析。合成的葡萄糖基Hb.p链氨基末端六肽偶联到BAS制备免疫抗原,免疫动物获得高效价的特异性抗体。实验结果提示,单一的离子交换方法分离糖化血红蛋白并不理想,必须与亲和层析结合,才能得到较高纯度HbAlc和HbAO。关键词:HPLC,糖化血红蛋白,离子交换树脂,亲和层析,抗体江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjective:Toestablishahighpressureliquidchromatographymetho

9、dfordetermingglycos

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
正文描述:

《糖化血红蛋白a1c的hplc测定方法建立与多克隆抗体的制备》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库

1、分类号UDCR446.1616密级坌珏编号1哩四S哩增Q!璺@江薄大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目糖化血红蛋白Alc的HPLC测定方法建立与多学科专业作者姓名指导教师答辩日期2011年06月1O日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致,允许论文被查阅和借阅,同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询,

2、授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。

3、本学位论文属于不保密刨。指导教师签名:旷F嘶k汕“年6月/L日人爪Ⅵl刘r卦,狲名,别侣辎Ⅳ作月文厶。,、.'、砑一-一蛐年学沙4独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果,也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均

4、已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。参日翁v匆寻L∥月孙毛签E懿年,叩●)刘沙论:位期学日6分类号B垒垒鱼:!UDC616多扁号lQ2窆窆SQ墨!垒Q!窆硕士学位论文糖化血红蛋白A10的HPLC测定方法建立与多克隆抗体的制备EstablishmentofHighPressureLiquidChromatographyMethodandPreparationofPolyclonalAntibodyforGlycosytedHemoglobinAlc作者姓名:涂国华指导教师:陈盛霞教授姜旭淦副教授申请学位:硕士学科专业:临床检验诊断学

5、论文提交日期:2011年04月26日论文答辩日期:2011年06月10日学位授予单位:江苏大学学位授予日期:2011年06月答辩委员会主席:许化溪评阅人:8江苏大学硕士学位论文摘要目的:建立糖化血红蛋白Ale的HPLC测定方法。从正常人红细胞中分离和纯化Alc,并制备糖化血红蛋白Alc的多克隆抗体。方法:以Bio.Rex70[jH离子交换树脂为填料,在HPLC仪上采用梯度洗脱分离测定HbAlc,对50例健康人和50例糖尿病患者HbAlc进行测定。采集健康人全血,分离红细胞并制备溶血液,采用离子交换层析法和硼酸琼脂糖亲和层析法,分离和纯化HbAlc和HbA0。合

6、成Hb的p链氨基末端六肽,经加入葡萄糖基团后,偶联到BSA上,制备免疫抗原。将该抗原(1.2mg/m1)与等体积福氏完全佐剂乳化后,每只小鼠0.12mg抗原皮下多点免疫Balb/cd、鼠,于第3周、第5周和第7周加强免疫并采集尾静脉血测定效价,第8周摘取小鼠眼球收集血液,以酶联免疫吸附实验检Nd,鼠血清HbAlc抗体效价。结果:Hb、HbAlc和HbA0的吸收光谱一致,吸收峰均为415nm,HPLC.离子交换层析方法能使HbAlc与HbAl(a+b)、HbA0清楚分离,HbAlc峰面积或峰高与标本中HbAlc含量成正比。50例健康人HbAlc检测结果为3.3%

7、~6.1%,50例糖尿病患者HbAlc检测结果为6.8%~14.4%。健康人红细胞溶血液,采用离子交换层析手工装柱分离提取HbAlc和HbAO峰值部分,HPLC法测定纯度分别为79.78%和97.42%,再经亲和层析纯化,HbAlc纯度可达94.5%,HbAO纯度可达99.7%。纯化抗原HbAlc可作为ELISA包被抗原来检测抗体效价,纯化抗原HbA0可作为ELISA包被抗原来检测交叉反应。合成抗原与福氏佐剂乳化后免疫Balb/Cd',鼠4次后,抗体效价达1:10000"---"1:100000。结论:Bio.Rex70.HPLC法测定糖化血红蛋白具有精密度好

8、、准确度高、线性范围宽等优点,可用于GHb或HbAlc常规方法的评价和临床标本糖化血红蛋白Alc的HPLC测定方法建立与多克隆抗体制备的分析。合成的葡萄糖基Hb.p链氨基末端六肽偶联到BAS制备免疫抗原,免疫动物获得高效价的特异性抗体。实验结果提示,单一的离子交换方法分离糖化血红蛋白并不理想,必须与亲和层析结合,才能得到较高纯度HbAlc和HbAO。关键词:HPLC,糖化血红蛋白,离子交换树脂,亲和层析,抗体江苏大学硕士学位论文ABSTRACTObjective:Toestablishahighpressureliquidchromatographymetho

9、dfordetermingglycos

显示全部收起
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。
关闭