牛奶掺豆浆和奶粉的pcr检测

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1、万方数据·研究报告·生物技术通报BloTEcHNoLoGY8ULLETlN2010年第5期牛奶掺豆浆和奶粉的PCR检测陈沁徐仙姚丽萍(上海大学生命科学学院，上海200444)摘要：以光明纯牛奶和酸奶、蒙牛纯牛奶和酸奶为材料，按不同浓度在牛奶中掺杂豆浆和奶粉，提取DNA，利用PCR技术检测牛奶掺杂后的多态性情况。结果表明，用引物S11l进行PCR扩增可以有效地区分牛奶、酸奶、豆浆，并且区分不同品牌牛奶的产品；用引物S1015和S109进行PcR扩增能检测出牛奶中是否掺杂了豆浆，检出限为3％；用引物S111进行PcR扩增能检测出牛奶中是否掺杂奶粉，检出限为40％。关键词：牛奶PcR

2、扩增豆浆奶粉DeterminingtheAdulterationofNaturalMilk岍thSoymilkandMilkPowderUsingPCRChe玎QinXuXianYao“ping(sc^∞Zo，￡咖5如埘碧，鼽n昭^口i￡，n觇巧毋，S^口n跏df200444)Abst阻ct：ExtmctedDNAfmmadultera“onofnatumlmilkwithdifferentconcentration8ofsoymilkandmilkpowderwa8detectedbyPCRandItsPoly·morphismwa8analyzed．Theresultssh

3、owedthatPCRelectrophoretograme8ofp“merS11couldnotonlydi仃bren-tiateamongmilk，yogurtandsoymilkbuta180distinguishtheproductsofbrand8．Amplific8tionofprimerS1015andS109coulddetectwhetherthenatumlmilkwasadulte豫tedwithsovmilkwith3％detectionlim“andthedetectionlimitofaduler8tionofnaturalmilkwithmilkp

4、owderusingPCRamplifiedwithprimerSllwas40％．KeywOrds：MilkPCRamplificationSoymilkMiIkpowder随着人们生活水平的提高，牛奶已成为大众化食品，但不少不法分子在经济利益的驱动下制假造假，严重危害了消费者的利益，牛奶的品质问题也受到科学’1j作者的重视¨。41。韩东海等归。运用近红外光谱技术检测纯牛奶、奶粉、掺假奶，实现了纯牛奶中奶粉的鉴定，当奶粉掺入量为50％，其正确判别率为100％，但图谱的读取需要较强的专业知识，测试仪器体积庞大。马志科等。61按两种原理进行了牛乳中掺豆浆的鉴别试验，原理一是由于大

5、豆及其制品中含有黄酮类化合物，如果牛乳中掺入豆浆，在碱性条件下会呈明显黄色，加酸颜色消失；二是由于大豆制品中含有异黄酮，其结构中带有酚羟基，能被溴水氧化为黄色化合物并析出沉淀。按这两种原理均能检出5％豆浆掺入量，但化学试剂溴水本身颜色会影响观察颜色变化，且反应受温度影响较大，一定程度限制了试验的精确性。分子生物学检测方法具有简易、直观的优点，且稳定性、重复性较好"1。鉴于此，本试验拟建立基于PCR的检测牛奶掺豆浆和奶粉的方法¨1。1材料与方法1．1材料超市购买的光明纯牛奶和酸奶、蒙牛纯牛奶和酸奶、光明奶粉、豆浆。试验所用引物均为上海生工合成的，序列见表l。表1引物序列引物序列(

6、5’一3’)S128S129SlllSIOl5S109GGGATATCGGCCAAGCTTCCCTTCCGCAGTCTACAGCCACTGTAGCTCCG收稿日期：2009．12一14作者简介：陈沁，女，副教授，博上，研究方向：植物生理与分子生物学；E-mail：chenqincc@yah¨com．cn万方数据2叭。年第5期陈沁等：牛奶掺豆浆和奶粉的PcR检测1631．2牛奶DNA的提取参照田雨p1的方法略加修改。将牛奶、酸奶、豆浆分别置于50mL的离心管中，4℃、2000×g离心10min，弃上清，用酒精棉球小心擦去管壁上的乳蛋白、乳脂，其中牛奶重复操作3次。10mLPBs重

7、新悬浮，轻轻振荡，重复操作1的离心擦拭步骤。4℃、10000×g离心lmin，加入440¨LTEN(1mL1mol／LTris+0．2mLO．5moL／LEDTA+O．5844gNaCl定容至100mL)和60“LO．2mol／LNaOH，剧烈振荡，直到沉淀完全悬浮，取600¨L上述裂解液置于1．5mLEppendorf管中，95℃水浴8min，冷却离心取上清液。加入等体积的SEVGA(氯仿：异戊醇=24：1)，混匀，4℃，12000×g，离心10min，取上清液。加入3¨LRNaseA，3