一种改进的ndv提纯方法及纯化后病毒特性分析

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1、中国查筮量匡堂垒生塑剑旦堂坌金塑主垦丝生塑堂金量匡丝生物学童些耋堡全兰堂笙堂垄堑过金迨塞塞一种改进的NDV提纯方法及纯化后病毒特性分析。刘澜1,2，李士成2，张守峰1，朱万光3，扈荣良¨(1军事医学科学院军事兽医研究所病毒室，吉林长春130062；2山东滨州华宏生物制品有限责任公司山东滨州256600；)[摘要】使用PEG一6000浓缩新城疫病毒F48E9，然后以连续蔗糖密度梯度离心法和凝胶过滤层析法分别提纯，通过SDS—PAGE和Westem—blot分析其纯度，电镜观察病毒形态，血凝试验检测纯化病毒

2、的活性。结果表明：上述两种方法均获得满意的纯化病毒，但二者相比较，以凝胶过滤法纯度较高，形态完整，病毒活性没有改变，且回收率高。结论：以SepharoseCL一2B凝胶过滤层析是一种较理想的提纯新城疫病毒的方法。一【关键词】NDV；SepharoseCL一2B；凝胶过滤；纯化；特性AnimprovedprocedureofNDVpurificationandbiologicalpropertiesanalysisofpurifiedvirusLIULanl，一，XIAOYue—qiangI，ZHANGS

3、hou—fen91，LIShichen92，ZHANGLecui3，HURong—lian91’(MilitaryVeterinaryInstitute，AcademyMedicalSciences，PLA，Changchun130062，China；ShandongBinzhouHnahongBiologyProductsLimitmlResonsibilityCompanyBinzhou256600，China；CollegeofAnimalSciences，LaiyangAgriculturalC

4、ollege，Qingdao266109，China)AbstractTheNDVF48E9strainthatpropagatedinSPFembryonatedchickeneggsw鹊concentratedbypolyethy-leneglycol一6000，thentheviruswaspurifiedbygelfiltrationchromatographyandcontinuoussucrosegradientcen·trifugerespectively．Itspuritywasanal

5、yzedbySDS—polyacrylamidegelelectrophoresisandWestern—blot．Thebiologi-calpropertieswereobservedbyelectronmicroscopyandhemagglutinationtest．Theresultsshowedthatthepurityofvireswassatisfiedbyusingthetwoprocedures，butthegelfiltrationwagbetterthansucrosegradi

6、entcentrifuge，notonlywerebiologicalproperties．butalsowithhighrecovery．SothegelfihrationbyusingSephamseC(一2BisanidealmethodtopurifytheNDV．KeywordsNewcastlediseasevirus；SepharoseCL一2B；gelfiltration；purity；biologicalproperties新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus，NDV

7、)是副粘病毒科(Paramyxoviridae)，腮腺炎病毒属(Rubulavims)成员，所引起的新城疫，也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是一种急性、高死亡率、高度接触性传染病。该病毒粒子呈圆形，直径100—250nm，囊膜上有纤突[1

8、。目前，多选用鸡胚培养该病毒，由于获得的尿囊液含有大量的杂蛋白分子，故在应用于单抗制备或其他研究时需要提纯，方法主要是蔗糖密度梯度离心，但由于在提纯过程中病毒回收率较低，且在高离心力和高渗蔗糖作用下对病毒的活性产生不良影响。因此为了获得高纯度、高活性的病毒悬液，以减轻单抗制备过

9、程中筛选工作的强度，选用SepharoseCL一2B，通过凝胶过滤方法对该病毒进行提纯，同时还采用蔗糖连续密度梯度方法对差速离心后的病毒浓缩液进一步提纯，比较该两种方法对提纯病毒的各种影响差异。1材料和方法1．1主要材料NDVF48E9株，本室保存；SPF种蛋，购自哈尔滨兽医研究所；SephamseCL一2B，购自PharmaeiaBiotech公司；HRP标记的羊抗鼠IgG，购自Sigmao1．2主要仪器高速冷冻离心机(HIMAC)，LE