福寿螺在甲氨基阿维菌素影响下酶活性探究

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1、福寿螺在甲氨基阿维菌素影响下酶活性探究　　摘要：本文主要研究甲氨基阿维菌素对福寿螺酶活性影响，以几组对照试验分析甲氨基阿维菌素对福寿螺的作用机理及影响，旨在为研究福寿螺的防控措施及高效安全的杀螺剂提供依据及帮助关键词：福寿螺；甲氨基阿维菌素；影响；酶活性中图分类号：S482.3文献标识码：ADOI：10.11974/nyyjs.20161233025近几十年来，福寿螺在我国多个省份迅速蔓延，严重的影响农产品的质量与产量，并且由于福寿螺是广州管圆线虫的寄宿主之一，一旦人类感染常会引起急性头痛、发热、四肢无力、皮肤过敏等症状，严重者可致痴呆或者死亡1实验

2、准备按标准参照傅先元的分级标准，选取成螺个体重量为151.5g，在相同条件下进行试验预处理，之后再分别进行对照实验5浸螺法进行毒力测定：称取一定量的90.2%甲氨基阿维菌素原药，用丙酮溶解后配置成母液，加水稀释，成螺的处理浓度为0.8、0.4、0.2、0.1、0.05mg/L，均设清水为对照处理，每个浓度重复3次。用小桶（8.75cm×8.75cm×16.5cm）盛500mL药液和清水，每桶投螺15只。在25±1℃的恒温室浸泡福寿螺，隔6h观察福寿螺的行为，分别于24h、48h统计死亡情况，计算死亡率和校正死亡率酶液提取：采用浸螺方法对成螺进行毒力测

3、定，用DPS6.55软件建立毒力回归方程，并设置LC25、LC50、LC753个质量浓度和空白对照，试验开始后，分别于6h、12h、24h、48h取样。快速称取1g肝脏置于研钵中，用剪刀剪碎，加入一定量的液氮后快速研磨，分别加入相应的试剂检测各种酶含量1.1实验方法1.1.1谷胱甘肽S一转移酶（GSTs）活性测定用移液枪依次加入4x10-3mol/LCDNB50?L、13.33mmol/LGSH60?L、50?L酶液、0.06mol/LpH7.0磷酸缓冲液90?L于96孔酶标板中，总体积为250?L，反应条件于26℃下，用酶标仪在340nm波长下测定

4、其吸光度值。每30S读数1次，共记录15min内OD值变化。对照孔中加入50?L磷酸缓冲液代替酶源液，其他参数一样。GSTs单位定义：lmg组织中lmin催化分解1?mol底物为1个酶活力单位（U）。以反应速度表示GSTs酶活性（OD/mgpr./min）1.1.2乙酰胆碱酯酶（ACHE）活性测定用移液枪准确地移取150?L酶源上清液和50?L50.1mol/LPH8.0的磷酸缓冲液于96孔酶标板中，然后依次加入0.01mol/L二硫代双硝基苯甲酸（DTNB）溶液50?L、O.075mol/L碘化硫代乙酰胆碱ATchI溶液50?L，在酶标仪测定下40

5、5nm波长测定其吸光度值。该反应于26℃15min内（30s为间隔）的OD值变化。以磷酸缓冲液作为空白对照，以反应速度表示乙酰胆碱酯酶活性（OD/mgpr./min）1.1.3超氧化物歧化酶（SOD）活性测定邻苯三酚自氧化速率测定：依次加入0.1mol/LTfis.Hcl4.5ml缓冲液、4.2mL二次蒸馏水，对照管加入10mmol/L0.3mLHcl，样品管加入2.5mmol/L0.3mL邻苯三酚，总体积为9mL。置于倾入光径lcm比色杯中并计时，于325nm波长下测定吸光度值A0，30s读数1次，共记录5min内的吸光度值，并以时间、吸光度值作坐

6、标图，邻苯三酚的自氧化速率AA0是用该线性方程的直线斜率表示。每次测定重复4次，确保实验结果的准确性此操作方法同上，但在加入邻苯三酚之前，一定先加入300?L的酶源上清液。并减少加入二次蒸馏水确保蒸馏水一样。迅速倒入1cm比色皿中，以0.01mol/LHCl缓冲液为参比，于325nnl波长下测定吸光度，每隔0.5min计数，连续测定5min。邻苯三酚自氧化速率测定用蒸馏水代替酶源上清液。每次实验重复4次，记录该曲线的斜率即为△ASOD.SOD酶活力单位定义为在25℃、pH8.2时每15min抑制邻苯三酚自氧化速率达50%的酶量邻苯三酚自氧化的抑制率定

7、义为：抑制率（E）=（△A0--△ASOD）/△A0×100%；单位酶活力（U/mL）=（E×V1×N）/（50%×V2）；SOD活力（U/mg）=单位活力/测定样品浓度；（E：邻苯三酚自氧化的抑制率；V1：反应液总体积；V2：测定样品体积；N：样品稀释液的倍数）酶活的抑制率（%）=[（对照组的酶活力一受试组的酶活力）/对照组的酶活力]×1001.1.4酚氧化酶（PO）活性测定采用磷酸钠盐缓冲体系，在2mL的测活体系（含0.1mol/LpH6.8的Na2HP04―NaH2P04缓冲液和8mmol/L邻苯二酚中加入200?L酶源上清液，28℃检测波长为

8、430nm处的吸光度值，并以时间、吸光度值作坐标图，酚氧化酶活力用所得的直线斜率来表示。在27℃时每lmin