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1、用HPLC分析饮料中的咖啡因和其他黄嘌呤应用食品和香料作者前言WilliamJ.LongandRonaldE.Majors黄嘌呤是一组生物碱，他们常被用作温和刺激物和支AgilentTechnologies,Inc.气管炎治疗药物，特别是治疗哮喘。最常见的黄嘌呤2850CentervilleRoad是咖啡因，它存在于诸如咖啡豆、茶叶和可乐果中，Wilmington,DE19808-1610USA在可可豆中含量较低。令人吃惊的是，巧克力是一种弱的刺激剂，因为它含有可可碱、茶碱和咖啡因这些甲基黄嘌呤。这些黄嘌呤的化学结构
2、如图1所示。黄摘要嘌呤在生物体内几乎被100%的吸收，摄取后几分钟之内就出现在血液中。黄嘌呤刺激中枢神经系统，可许多食品和饮料产品中都含有黄嘌呤。这些化合物可以在以影响循环系统，使支气管肌肉松弛。众所周知，咖AgilentTC-C18色谱柱上采用简单的等度洗脱获得分离。该啡因具有减少睡意和疲劳，提高机敏性的作用。一种方法适合于各种饮料中咖啡因和其他常见黄嘌呤的分析。相对新的黄嘌呤，即3-丙基黄嘌呤，比其他黄嘌呤治疗哮喘具有更好的疗效。黄嘌呤很容易在反相C18柱上得到分离[1,2,3]。尽管离子对色谱也有用于咖啡因的分
3、离[2]，但采用缓冲液和乙腈的反相色谱流动相系统更简单。本应用文摘报道了采用AgilentTC-C18色谱柱的黄嘌呤类化合物分离，以及饮料中的咖啡因分析。该色谱柱的填料是5µm粒径的超纯（B型）硅胶C18键合相，孔径130Å，碳载量为12%C。填料是封端的，对极性化合物，特别是含有碱性基团的化合物具有很好的分离性能。在AgilentTC-C18色谱柱上分离黄嘌呤标准品选择AgilentTC-C18色谱柱是因为其通用性，它可用于极性和非极性化合物混合物的分离，且很适合于有机相比例低的流动相。某些高覆盖率的反相填料在有机
4、相比例低的流动相中会发生塌陷，而TC-C18填料的表面特性消除了这一问题。图2是4种黄嘌呤标准品在4.6×150mmAgilentTC-C18色谱柱上得到的色谱图。采用pH7的磷酸缓冲液，峰形对称，结果的重复性很好。出峰顺序基于黄嘌呤的相对疏水性。图1.黄嘌呤的基本结构色谱条件色谱柱AgilentTC-C18,4.6×150mm,5µm流动相92%25mM磷酸缓冲液pH7,8%乙腈流速1.0mL/min检测UV270nm进样量10µL温度40°C图2.在AgilentTC-C18色谱柱上分离黄嘌呤化合物标准品2饮料中
5、咖啡因的分离采用与图2相同的条件常见无糖可乐饮料中的咖啡因得到了完全的分离，如图3所示。溶剂峰和其他赋形咖啡因存在于（天然存在或添加）许多常用饮料中，剂的保留时间短，不干扰分离。在270nm，咖啡因如苏打水、咖啡和茶。我们研究了几种饮料样品中分有很强的信号。离咖啡因和其他成分的可能性。以市售的两种苏打水样品和一种咖啡样品为例，对于样品制备，苏打水经脱气，过滤，然后不经稀释直接注入色谱柱进行分离。咖啡样品经过滤后，不经稀释直接进样。mAU饮料样品有出色的保留重复性5040咖啡因溶剂峰和赋形剂不干扰分离302010002
6、468101214min色谱条件色谱柱AgilentTC-C18,4.6×150mm,5µm流动相92%25mM磷酸缓冲液pH7,8%乙腈流速1.0mL/min检测UV270nm进样量10µL温度40°C图3.在TC-C18色谱柱上饮料-无糖可乐饮料的分离3图4显示了另一种常见的红色苏打水得到的类似色谱图。同样，样品中未鉴定的其他组分在咖啡因之前很早流出。令人惊奇的是在这种苏打水样品中检测到少量的茶碱。mAU其他组分与目标的化合物分离良好60咖啡因5040302010茶碱002468101214min色谱条件色谱柱A
7、gilentTC-C18,4.6×150mm,5µm流动相92%25mM磷酸缓冲液pH7,8%乙腈流速1.0mL/min检测UV270nm进样量10µL温度40°C图4.饮料-常用的红色苏打水4最后，将一种非常受欢迎的、具有浓郁香味的市售咖啡直接注入AgilentTC-C18色谱柱进行了分析。图5显示这种咖啡中的咖啡因浓度比苏打水中的浓度高。虽然我们没有做定量分析，但咖啡因的相对含量要比苏打饮料中的高3到4倍。mAU浓咖啡含有大量的咖啡因25020015010050002468101214min色谱条件色谱柱Agil
8、entTC-C18,4.6×150mm,5µm流动相92%25mM磷酸缓冲液pH7,8%乙腈流速1.0mL/min检测UV270nm进样量10µL温度40°C图5.饮料-驰名的市售咖啡5www.agilent.com/chem/cn结论使用简单的缓冲液流动相等度洗脱，可在AgilentTC-C18反相色谱柱上分离常见的黄嘌呤化合物。这一方法已经
