兽药30天和90天喂养试验指导原则

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1、兽药30天和90天喂养试验指导原则一、概述（一）定义与目的当评价某受试药物的毒作用特点时，在了解受试药物的纯度、溶解特性、稳定性等理化性质和有关毒性的初步资料之后，可进行30天或90天喂养试验，以提出较长期喂饲不同剂量的受试药物对动物引起有害效应的剂量、毒作用性质和靶器官，估计亚慢性摄入的危险性。90天喂养试验所确定的最大未观察到有害作用剂量可为慢性试验的剂量选择和观察指标提供依据。为了确保30天或90天喂养试验结果的真实性、可靠性和可追溯性，根据新兽药研究的规律，结合国内兽药毒理学评价的实际情况制定了本指导原则。（二）适用范围本指导原则适用于评价兽用化学药品、中兽药、消毒剂及饲料药

2、物添加剂对动物引起的有害效应。二、试验设计（一）材料与方法1.实验动物选择啮齿类动物大鼠。为了观察受试药物对动物生长发育的影响，使用雌、雄两种性别的离乳大鼠（出生后4周）。试验开始时动物体重的差异应不超过平均体重的士20％。2.试剂（1）哺乳动物血球计数配套试剂。（2）血液生化学指标测定配套试剂。（3）组织标本固定用试剂（4）组织病理学检查常用试剂3.主要仪器（1）生物显微镜（2）全自动生化分析仪（3）血球计数仪（4）组织病理学检查常用仪器设备（二）试验步骤1.剂量组设计设3～5个剂量组和一个对照组。剂量选择高剂量组的动物在喂饲受试药物期间应当出现明显的中毒症状但不造成死亡或严重损害

3、；低剂量组不引起毒性作用，从而估计或确定出最大未观察到有害作用剂量；在高剂量和低剂量之间再设1～3个剂量组，以期获得比较明确的剂量-反应关系。剂量的设计可参考以下原则：（1）以LD5010％～25％为30d或90d喂养试验的最高剂量组，此LD50百分比的选择主要参考LD50剂量反应曲线的斜率。然后在此剂量下设几个剂量组。最低剂量不能低于靶动物可能摄入量的3倍。（2）对于求不出LD50的受试药物：30天喂养试验应尽可能涵盖靶动物可能摄入量100倍的剂量。对于靶动物摄入量较大的受试药物，高剂量组可以按最大耐受剂量设计。90天喂养试验根据30天喂养试验结果确定剂量，或者以靶动物的可能摄入量

4、的100～300倍作为最大未观察到有害作用剂量，然后在此剂量以上设几个剂量组，必要时亦可在此剂量以下增设剂量组。每个剂量组至少20只动物，雌、雄各半。如果在试验间期要处死实验动物进行检查，则需适当增加各组动物数。2.试验动物标记称重、标记编号和分组试验前购置离乳大鼠（出生后4周），雌、雄各半，饲养观察3～5天。分别选择健康雌、雄大鼠进行称重和标记编号，采用完全随机法，将其分为4～6组，每组两种性别大鼠均不得低于10只。3.给药方案首选将受试药物混入饲料中喂养（注意受试药物在饲料中的稳定性）。如有困难，也可加入饮水中或灌胃。当受试药物混入饲料时，需将受试药物给予剂量，按大鼠每日饲料摄入

5、量折算为饲料中受试药物浓度（mg/kg），30天喂养试验大鼠每日饲料摄入量按体重的10%折算，90天喂养试验大鼠每日饲料摄入量按体重的8%折算。饮水给予受试药物时，动物每日饮水量按体重的15～20%计算。灌胃时，大鼠灌胃量按1mL/（100g体重·日）计算。每天灌胃的时间点也应一致。4.试验观察试验期间，每天观察记录动物的一般行为表现、中毒及死亡情况；并同时记录大鼠饮水投入量和饮水剩余量；按周时间段测量记录实验大鼠体重、投入饲料量及剩余饲料量。5.检测（1）血液学指标必测血液学指标包括血红蛋白（Hg），红细胞计数（Ec），白细胞计数（Lc）及嗜中性（NL）、嗜酸性（AL）、嗜碱性（B

6、L）、淋巴（LM）、单核（ML）的分类计数等，必要时增加测定血小板数（Pl）和网织红细胞数（Rc）。30天喂养试验一般于试验结束时测定一次，90天喂养试验一般于试验中期和结束时各测定一次。各组不少于10只大鼠（雌、雄各半）采血进行血液学指标测定。（2）血液生化指标必测血液生化指标包括谷丙转氨酶（ALT或SGPT）、谷草转氨酶（AST或SGOT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、血清白蛋白Alb）、总蛋白（TP）、总胆固醇（TCH）和甘油三酯（TG）等。30天喂养试验一般于试验结束时测定一次，90天喂养试验一般于试验中期和结束时各测定一次。各组不少于10只大鼠（雌、雄各

7、半）采血进行生化指标测定。（3）病理检查①大体解剖30天喂养试验于试验结束，90天喂养试验于试验中期和试验结束，各组取10只大鼠（雌、雄各半）进行剖检（可结合采血进行）。做好记录，并将重要器官和组织固定保存。②脏器称量剖检试验大鼠的同时，称取大鼠体重及各主要脏器（包括肝、肾、脾、胃肠、睾丸、肺、心、卵巢子宫等）重量，做好记录。计算各脏器的相对重量（脏/体比值）。③组织病理学检查对高剂量组及对照组大鼠的主要脏器进行组织病理学检查，发现病变后再对较低剂量组大鼠