兽药小鼠骨髓细胞染色体畸变试验指导原则精品.doc

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1、兽药小鼠骨髓细胞染色体畸变试验指导原则一、概述(-)定义与目的染色体阶变试验是利用哺乳动物的培葬细胞检测受试药物对染色体畸变谤发性及其程度的特殊布理试验评价方法.染色体是细胞核中具有特殊站构和遗传功能的小体，当化学物质作用于细胞周期G1期和S期时，诱发染色体型呦变.而作用丁P2期时则诱发染色体单体型时变.给试验的大、小取腹茂注射秋水仙索，抑制细胞分裂时妨怪体的形成，以便增加中期分裂相细胞的比例，升使染色体丝缩短、分散，轮廓漕断.在显微镜下观察染色体数目和形态.为了确保小鼠骨湖细胞染色体畸变试验靖果的真实性、可靠性和可迫溯性.根据新兽药研究的规律，结合

2、国内兽药毒理学评价的实际情况制定了本指导原则。(%1)适用范围本指导原则适用于兽用化学药品、中兽药、消毒剂及饲料药物添加剂的哺乳动物体细胞遗传毒性检测.二、试验设计(-)材料与方法】.实验动物SPF小鼠.健康成年，体重为18〜22g,数盘100只左右，雌雄各半.2.试剂环磷酰胺，含Jt不低于98.5%.秋水仙素，分析纯，瓠化钟：分析纯，甲醇：分析纯：冰品酸：分析纯；196吉姆萨（Giemsa）染料，分析姓；染酸巍一.饿：分析纯；M■二垣钾：分析纯：柠株酸钠：分析纯：纯甘油.2.仪器生物显微镜（具lOOx油镜头）高心机怛温水浴（控温：37士0.5C）其

3、它实验室常用仪器3.试剂的配制（I）0.04%秋水仙素：称取40mg秋水仙素，加lOOmL^S水溶解.过滤除卸冰箱保存备用.，（2>2.2%柠&酸钠溶液：称取柠橡馥钠2.20g・溶于lOOmL蒸演水中.保存备用.（3）pH7.4磁酸盐缓冲液：l/15moI/L请酸氢二钠溶液：称取讲酸氧二钠9.47g溶于lOOOmL蒸馆水中.1/15moVL»酸二氢钾溶液：称取磷酸二氧钾9.07g溶于1000mL蒸tfi水中・将磷酸氢二钠溶液80mL与磷酸二氢钾溶液20mL混合.用酸度计调节pH至7.4.即配制成硝酸盐缓冲液.（4）0.075mol/L双化钾溶液：称取

4、5.59g盘化钾，济于lOOOmL蒸馋水中.（5）固定液：甲解3份,冰醋酸1份，混匀,临用时配制.（6）Giemsa储备液：取吉姆萨染料3.80g,置乳体中，加少量甲静研磨，逐渐加甲I?至375mL・溶解后再加125mL纯甘油，于371温箱保温48h,在此期间摇动数次，放置1~2周后过浊备用・（7）Giemsa工作液：取1mLGiemsa储备液加入9mLpH7.4磷酸缓冲液混匀即可，临用时配制.（二）试验步骤.1.剂量组设计设3个剂量组，即1/2、1/4和1/8LDy）剂量&另外设1个阴性（溶剂）对照组及I个阳性对照组.当受试物LD«）大于5（）00

5、mg/kg（或mL/kg）时.试验沮高剂量设为5000mg/kg（或mUkg）,将25OOmg/kg（或mL/kg）和1250mg/kg（或mL/kg）分别设为中剂量和低剂量.每组小W.I6只，雌、雄各半，确保给药后雄，雄小取至少各存活5只供采样、制片.2.阳性对照物及受就物溶液配偶（1）阳性对照物阳性对照物环编酸胺，给予剂量40mg/kg，按0.1~0.2mL/10g体重给于小鼠受试药物体税，计算需配制的溶液浓度，拟定需配制的溶液体积，计算配制溶液时需准确称取环磷酰胺的量.（2）受试药物滔液配制•根据受试药物物建化性质，选定溶剂，将受试药物配制成水

6、溶液（或乳化剂、混悬液、糊状物等）・必要时加入原溶剂或助患刑（如吐温-30、淀粉、羡甲基纤推素钠等）・各剂JR组受试药物溶液可采用2倍递次稀释法配制.根据受试药物的小鼠LD50,技0.1〜0.2mLH0g体重要求给予小鼠受试药物体枳，先确定I/2LDm剂置组（即高剂段鲍）受试药物溶液需配制的浓度.再确定各剂量组所需受试药物溶液体枳.将SLDa剂H•组受试药物溶液配制成初始溶液，计算配制溶液时需你取/It取受试药物的量.用天平或/移液管，称取或/附取受试药物置烧杯内.加入适量选定的溶剂溶解或/稀粹.转入容量瓶内.混匀并定容，即获徊l/2LDso刑量组（

7、高剂■组）所需浓度的受试药物溶液.分取一半体枳的溶液供l/2LD

8、标本制备在末次给药24h后处死动物.收扶细胞迸行标木制备.每组各处死雄眼和雄鼠不少于5只.按下列程序制片.（